新しいモノクロナル抗体(HG1-219)を用いたEIA法の確立と肝癌診断への応用

新型单克隆抗体（HG1-219）EIA方法的建立及其在肝癌诊断中的应用

• 批准号: 04670449
• 负责人: 波田 寿一
• 金额: --
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670449/
• 关键词: HuG-1細胞株; 肝細胞癌; 糖鎖抗原; 酵素免疫測定法; モノクローナル抗体

ヒト胃癌患者より新しい培養細胞株(HuG-1)を樹立し、この細胞及びその培養上清を免疫原としてモノクローナル抗体(MoAb)を作成した。そのうちの1つであるHG1-219抗体(Ab)と命名したAbを用いてサンドイッチ型のEnzyme immunoassay(EIA)法を確立した。本測定法(EIA-219)で測定される抗原(HG1-219Ag)の正常人(21名)の血清中でのmean±SDは30.5±14.5U/mlであり、正常人のmean+3SDの値をcut-off値とすると、慢性肝疾患では慢性肝炎、肝硬変、原発性肝癌でそれぞれ4.3%(2/47)、9.1%(4/44)、37.5%(18/48)で肝癌で陽性率が高かった。その他胃癌では27.3%(3/11)、肺癌4.5%(1/22)であった。そこで肝癌例でHG1-219Ag陽性者18例についてHG1-219Ag量と腫瘍サイズの関係を調べると、腫瘍径2cm以下が3例、2-5cmが4例、5cm以上の単発例が1例、多発又はび慢性肝癌が10例であり、HG1-219Ag量も腫瘍サイズの増大と共に増加する傾向を認めた。又2cm以下の微小肝癌でも陽性例を認めたことから肝癌のスクリーニングにも有用である可能性を示唆した。次に治療効果とHG1-219Agの変化を調べると、治療前HG1-219Ag高値例(4例)では、治療後は同抗原量の減少を認めたので、本抗原は腫瘍細胞由来と考えられた。一方肝癌の代表的腫瘍マーカーであるAFP、PIVKA-IIの本研究での陽性率はAFP(>400ng/ml)では26.7%(12/45)、PIVKA-IIでは33.3%(12/36)で、両抗原とEIA-219との間には相関を認めなかった。そこでAFP、PIVKA-II、EIA-219のコンビネーションアッセイを行った。いずれの二者の組合せよりも三者(AFP+PIVKA-II+EIA-219)の組合せで陽性率は75%(27/36)で最も高く、この時の特異性は90%であった。HG1-219Agの性状については、本抗原が過ヨウ素酸処理で抗体との反応性が消失し、CA19-9(300units)で約90%阻害されたが、CA125(300units)やL-Fucose(40mM)では約50%程度しか阻害されなかったので、HG1-219AgはCA19-9に類似の糖鎖がそのepitope考えられ、現在糖鎖構造の解析を行っている段階である。

A new culture cell line (HuG-1) was established from gastric cancer patients, and the cells and culture supernatant were used to prepare immunogen and MoAb. HG1 -219 antibody (Ab) was established by Enzyme immunoassay(EIA). The mean±SD of HG1 - 219Ag in serum of 21 healthy individuals was 30.5±14.5U/ml, and the mean±SD of normal individuals was 30.5±14.5U/ml. The mean ± SD of HG1 - 219Ag in serum of 21 healthy individuals was 30.5 ± 14.5U/ml. The mean ± SD of HG1 - 219Ag in serum of 21 healthy individuals was 30.5U/ml. Stomach cancer 27.3%(3/11), lung cancer 4.5%(1/22). The relationship between HG1 - 219Ag concentration and tumor size was adjusted in 18 cases of HCC, 3 cases of tumor diameter less than 2 cm, 4 cases of tumor diameter 2- 5 cm, 1 case of tumor diameter more than 5 cm, 10 cases of chronic HCC, and the tendency of HG1 -219Ag concentration to increase. In addition, small liver cancer less than 2 cm can be recognized as a positive case. After treatment, HG1 - 219 Ag concentration was increased in 4 cases. The positive rates of AFP and PIVKA-II in this study were 26.7%(12/45) for AFP(>400ng/ml) and 33.3%(12/36) for PIVKA-II and EIA-219. The development of AFP, PIVKA-II, EIA-219 and other related technologies are discussed in detail. The positive rate of AFP+PIVKA-II+EIA-219 was 75%(27/36), and the specificity was 90%. HG1 -219Ag is characterized by a loss of antibody reactivity due to acid treatment, CA19-9(300units) is approximately 90% resistant, CA125(300units) and L-Fucose(40mM) are approximately 50% resistant, HG1 -219Ag is approximately similar to glycan, and glycan structure analysis is currently underway.

项目成果

T. Hada, et al.: "Establishment of an enzyme immunoassay using monoclonal antibody (HG1-219) and its application for the diagnosis of hepatocellular carcinoma" Jpn. J. Cancer Res.83. 1366-1372 (1992)

T. Hada 等人：“使用单克隆抗体（HG1-219）的酶免疫测定法的建立及其在肝细胞癌诊断中的应用”Jpn。