血清コリンエステラ-ゼ異常症の病態解析とcDNAクロ-ニング

血清胆碱酯酶紊乱的病理分析及cDNA克隆

• 批准号: 02671113
• 负责人: 波田 寿一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02671113/
• 关键词: コリンエステラ-ゼ; Alu element; cDNAクロ-ニング

血清cholinesterase(ChE)異常症(完全欠損例,痕跡程度にChE活性を有する例、正常者の10%程度の活性を持つ例の3種類)を見いだし、これらについてChE遺伝子の異常の有無について検討した。 (1)完全欠損症例:発端者は糖尿病にて入院し、肝機能検査にてたまたま血清ChE活性が0であることが判明した。この患者の末梢血リンパ球よりDNAを抽出し、EcoRIで処理した後、0.8%low meltingーpoint agarose gelを用いて、2.5ー3.0kbの範囲のDNAを切り出し、精製後、λgt10のEcoRI siteに組み込み、genomic DNA libraryを作製した。4×10^5クロ-ンのスクリ-ニングをおこなった結果、4コのpositive hybridzing cloneが得られた。そのうち1コのクロ-ンに関して詳細なrestriction mapを作製した所、cDNA上5'端から675塩基に位置するBamHI siteより0.4kb下流に約0.3kbのDNA断片が挿入されていることが判明したので、問題となる部位のsequenceをおこなった。その結果exon2で、cDNAでは5'側から1061塩基と1062塩基の間に相当する部位に342bpのAlu elementが挿入されている事が明かになった。又、本症例の家系調査で本異常症は家族性であることが明かになった。 (2)痕跡程度にChE活性を有する例:in vitroのChE活性測定では活性を検出出来ないが、polyacrylamide gradient gel電気泳動で僅かに活性帯を認めた例である。本例についても(1)と同様に解析をおこなつたがcoding regionにはmutation,deletion,insertion等の異常はなく、現在5'上流域の検索を行つているところである。 (3)正常者の10%程度のChE活性を持つ例:(1)と同様の解析を行い5'側から1093番目の塩基がC→Gにpoint mutationをしており、これはN端から365番目のアミノ酸がGly→Argへの変化に対応するものであつた。従つて、本症例はpoint mutationの為に高次構造に変化をきたしChE活性の低下を生じている可能性がある。

Abnormality of serum cholinesterase(ChE)(complete deficiency, trace level, presence of ChE activity, normal level, 10% activity, presence of ChE activity, 3 types) (1)Complete impairment cases: diabetes mellitus, liver function test, serum ChE activity, 0. After EcoRI treatment, 0.8% low melting point agarose gel was used, 2.5 kb DNA was cut out, purified, λgt10 EcoRI site was organized, and genomic DNA library was prepared. 4×10^5 °-N °-N °A detailed restriction map was created to identify the BamHI site at position 675 on the upper 5'end of cDNA and a DNA fragment of about 0.3 kb downstream. As a result, exon2 and cDNA were inserted into the 342bp Alu element on the 5'side of the cDNA. In addition, the family investigation of this case shows that this abnormal disease is familial. (2)ChE activity is measured in vitro. ChE activity is measured in polyacrylamide gradient gel electrophoresis. In this example, the code region mutation,deletion,insertion, etc. are abnormal, and now the 5'upper basin search is abnormal. (3)Normal ChE activity of 10% of the level of examples:(1) the same analysis of the line 5'side from 1093 to C→G point mutation from N terminal from 365 to acid Gly→Arg point mutation from 5' side. However, in this case, there is a possibility that point mutations may cause changes in higher-order structures and lower ChE activity.

项目成果

Y.Ikarashi,et al.,: "Determination of succinylcholine hydrolytic enzyme activity in human plasma." J.Chromatogr.98. 23-34 (1990)

Y.Ikarashi 等人：“人血浆中琥珀胆碱水解酶活性的测定”。

波田 寿一 他: "家族性無コリンエステラ-ゼ血症の遺伝子解析" 医学のあゆみ. 7. 451-452 (1990)

Juichi Hata 等人：“家族性胆碱酯血症的基因分析”《医学史》7. 451-452 (1990)。