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哺乳類エンブリオの新しいインビトロ研究システムを用いた神経回路網形成機構の研究

利用新型哺乳动物胚胎体外研究系统研究神经网络形成机制

基本信息

批准号：
05680717
负责人：
鈴江俊彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1994
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類エンブリオの新しい研究システムとして研究代表者が独自に開発した経胎盤灌流法(Suzue,1990;1992)について、方法に改善を加えるとともに、これを応用して胎仔の神経回路網形成機構についての研究を行った。方法上の改善点は第一に、強力な分子生物学的手法の適用が可能であるマウス胎仔に経胎盤灌流法を適用する方法を確立し、マウス胎仔をin vitroで30時間生存させることが可能になったことである(Suzue,1994)。第二の改善点は、胎仔の無菌的な取り扱い方を確立したことである。このことにより、コンタミネーションを生じやすい富栄養の培養液を使用して、胎仔を長時間維持することが可能になった。以上の改善を加えた経胎盤灌流法を用いて、胎仔の神経系の発達過程について検討した結果、マウス胎仔において神経系の活動により生ずる自発運動の出現時期が、従来in vivoの実験の結果として言われてきたよりも2-3日早い胎齢11-12日に出現することが、新たに明らかになった。胎齢12日における胎仔の自発運動はすでに相当程度の複雑性を示した。このような複雑な運動が胎生の早い時期から出現しているという結果は、神経回路網形成に重要な関与をする神経の活動についてのこれまで常識に大きな変更を迫るものであり、初期の神経回路網形成に神経の活動が関与しているという新たな可能性を強く示唆している。また、経胎盤灌流によりin vitroで生存させたマウスに蛍光色素を適用し、マウスの大脳、脊髄等の様々な神経細胞を生きたまま選択的に染色、観察することが可能であり、また神経細胞を生きたまま単離して、培養することが可能であることも明らかになった。以上の結果は、哺乳類の発生神経科学的研究の新しい方法である経胎盤灌流法の可能性を大きく拡張するものであり、今後この方法を用いて更に多くの新たな知見が得られることが期待される

Mammalian research is new and representative of the development and improvement of the placental perfusion method (Suzue,1990;1992). The improvement points in the method are the first and most powerful molecular biological methods to be applied to establish the method of fetal placenta perfusion in vitro for 30 days (Suzue,1994). The second improvement point is the establishment of a sterile method for the fetus. The growth of the fetus is possible due to the use of a culture medium rich in nutrients. The above improvements were added to the application of CPT, the development of fetal nervous system, the occurrence of spontaneous movement in fetal nervous system activity, the occurrence of spontaneous movement in vivo, and the results of CPT in vivo. The spontaneous movement of the fetus on the 12th day of pregnancy was shown to be quite complex. The results show that the early stages of the complex movement are important for the formation of the neural network and the early stages of the formation of the neural network are important for the formation of the neural network. In vitro, the pigment is suitable for use in the production of human brain cells and in the selection of human brain cells for staining and observation. The above results are new methods for mammalian neuroscience research. The possibility of placental perfusion is greatly expanded. More new knowledge is expected in the future.