昆虫GABAレセプターの構造と性質に関する研究

昆虫GABA受体结构与特性研究

基本信息

  • 批准号:
    06660109
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.34万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

昆虫のγ-アミノ酪酸(GABA)レセプター/クロルイオンチャネル複合体の構造や機能を解明するために、α様サブユニットの単離・精製とβ様サブユニットcDNAのクローニングを試みた。まず、Musca domesticaの胸腹部膜タンパク質を0.1%ジギトニンで可溶化し、ベンゾジアゼピン(〔^3H〕Ro 5-4864)の結合タンパク質を追跡した。Diazepam固定化Affi-Gel 10を調製し、可溶化結合タンパク質をこれに吸着させた。NaClあるいは合成リガンドで溶出を行うと、結合タンパク質は0.6 M NaClで溶出された。設備備品として購入したセル・ハーベスターを溶出画分の活性測定に利用すると効率よく活性測定ができた。結合活性は約30%しか回収できなかったが、精製倍率は約220倍であった。活性画分のSDS-PAGEを行い、これをCBB染色すると、76 KDa、65 KDa、59 KDa、46 KDa、44 KDa、および33 KDaのメジャーバンド、さらに41 KDaと38 KDaのマイナ-バンドが現れた。〔^3H〕Flunitrazepamでフォトアフィニティーラベルし、SDS-PAGEを行ったところ、41 KDaのマイナ-バンドに最も高い特異的結合活性が見られ、65 KDa、59 KDa、46 KDa、および38 KDaのバンドにも特異的結合が認められた。これらのタンパク質とGABAレセプターとの関係を探るため、現在プロテインシークエンスを行っている。一方、Blattella germanicaの頭胸部あるいはDrosophila melanogasterのcDNAライブラリーを用いてPCRを行い、膜貫通M1領域からM4領域の様々な鎖長を持つと思われる増幅産物をpUC119のクローニングサイトに挿入後、DNAシークエンスを行ったが、既知サブユニットと類似の領域は見られなかった。現在、同様の実験を継続して行っている。
The structure and function of insect gamma-butyric acid (GABA) complex were studied. The structure and function of insect gamma-butyric acid (GABA) complex were studied. Musca domestica's thoracic and abdominal membrane quality is 0.1% soluble, and the binding quality of Musca domestica ([^3H] Ro 5-4864) is traced. Diazepam Immobilized Affi-Gel 10 is prepared, solubilized, and adsorbed. NaCl is dissolved in 0.6 M NaCl. The equipment was purchased and the activity of the dissolution assay was determined. The binding activity is about 30% and the refining ratio is about 220 times. SDS-PAGE of activity analysis showed that CBB staining was 76 KDa, 65 KDa, 59 KDa, 46 KDa, 33 KDa and 38 KDa respectively. Flunitrazepam has the highest specific binding activity at 65 KDa, 59 KDa, 46 KDa, and 38 KDa. The relationship between GABA and GABA is explored and discussed. A side, Blattella germanica head and chest, the head and chest of Drosophila melanogaster. Now, the same thing happens.

项目成果

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    $ 1.34万
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    $ 1.34万
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    $ 1.34万
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  • 资助金额:
    $ 1.34万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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    03J08634
  • 财政年份:
    2003
  • 资助金额:
    $ 1.34万
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    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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    08780017
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    $ 1.34万
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    04770115
  • 财政年份:
    1992
  • 资助金额:
    $ 1.34万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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