分子生物学的手法を用いたγ-アミノ酪酸生成乳酸菌の検出方法の開発

开发利用分子生物学方法检测产γ-氨基丁酸乳酸菌的方法

• 批准号: 16650181
• 负责人: 磯部 由香
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650181/
• 关键词: γ-アミノ酪酸; 乳酸菌; 分子生物学的手法; 発酵食品

昨年度に発酵食品から分離した乳酸菌のうち、なれずしから分離した3株がLactobacillus plantarumと簡易同定され、同じ属・種でありながら、γ-アミノ酪酸(GABA)生成能に違いが見られた。そこで、理化学研究所からL.plantarum標準株7株を購入し、グルタミン酸含有培地にて嫌気培養を行い、培地中に生成したγ-アミノ酪酸(GABA)量を、高速液体クロマトグラフィー(逆相イオンペアクロマトグラフィー/ポストカラム誘導体化法)にて測定を行い、GABA生成能の有無を確認したところ、GABA生成株、非生成株、わずかに生成する株の3つに分類された。この10株を用い、昨年度、設計したプライマーを用いて、グルタミン酸脱炭酸酵素関連遺伝子であるgadBを増幅させ、塩基配列の違いについて検討を行った。その結果、GABA生成能と塩基配列との間に相関はなく、10株のgadB遺伝子はほとんど同じ配列であることが明らかとなった。よって、L.plantarum関しては、gadB遺伝子の配列を利用したGABA生成菌の検索は困難であることが明らかとなった。GABAの生成についてはgadB遺伝子以外にもgadCおよびgadR遺伝子の関与が報告されており、これらの違いについても検討する必要がある。また、昨年度、設計したプライマーを用いて、L.plantarumの他にもStaphlococcus pasteuriおよびLactobacillus brevisのgadB遺伝子を増幅させることができたので、今後は、この株についてGABA生成能との関連を検討していく予定である。

In the past year, lactic acid bacteria were isolated from fermented foods. Three strains of Lactobacillus plantarum were isolated from fermented foods. They were identified by simple identification, genus, species and γ-butyric acid (GABA) production. 7 L.plantarum standard strains were purchased from the Institute of Physical and Chemical Sciences, and the amount of GABA produced in the culture medium and in the culture medium was high.(Reverse phase induction method) Determination of GABA production activity, confirmation of the presence or absence of GABA production activity, GABA producing strains, non-producing strains, and GABA producing strains. These 10 strains were used, designed, tested, tested The results show that GABA production can be used in the same way. L.plantarum is difficult to realize by using GABA-producing bacteria GABA is generated in the presence of gadB genes, gadC genes and gadR genes, and is reported in the presence of gadB genes. In the past year, the design of the plant has been improved, and the relationship between Staphloccus pasteuri and Lactobacillus brevis gadB gene has been discussed.