DNA aneuploidyによる腫瘍診断に関する基礎研究

DNA非整倍体诊断肿瘤的基础研究

• 批准号: 06660407
• 负责人: 植村 興
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06660407/
• 关键词: と畜検査; 腫瘍; フローサイトメトリー

フローサイトメトリーによる屠畜検査の現場における獣畜の白血病や腫瘍の迅速・客観的な診断法に関する基礎的実験を行い、下記の通りの知見を得た。(1)対照とする正常細胞の選定;同一個体の正常ウシ臓器(腎臓、肝臓、脾臓、肺臓、副腎、リンパ節、骨格筋)ならびに市販の肝臓5種類をpropidium ioide(PI)でDNA染色し、臓器間における発色強度の変動の有無を検討した結果、最大約20%の差が認められた。したがって、DNA Index(DI)を測定するには、リンパ球よりも正常組織を対照とするのが好ましいことが示唆された。(2)検査材料の処理方法の確立;検体となる臓器固形組織をフローサイトメトリーにかけるためには細胞を単細胞に分散させる必要がある。そのための酵素処理方法を酵素(trypsin,pronase,collagenase,dispase)で検討し、ヒトの細胞分析で用いられている方法(細切-トリプシン処理-エタノール固定-トリトンX100によるDenucleation-PI染色)が適用できることが再確認された。(3)検査材料の保存方法の確立;同一個体(イヌ臓器)の新鮮材料と凍結保存材料について、DIを比較したが、いずれでも分析可能なことがわかった。(4)フローサイトメトリー操作法の確立;染色条件(PI、50μM10分)や機器の運転条件(レーザー出力:受光感度の組み合わせ)を検討し、実際の分析が可能と考えられる操作法を見い出した。(5)DNA Indexの標準値データの集積;予定数に達せず、現在引き続いて検討中である。(注)DNA Index用検体処理試薬(NUCYCL^<TM>)が米国EXALPHA社から新発売された。本年2月に入手して(2)、(3)、(4)について予備的な比較検討の結果好成績を得た。検体処理の簡易化・標準化によりフローサイトメトリーの実用化が促進されるものと推測された。

The following is a summary of the basic findings of on-the-spot animal screening and rapid diagnosis of leukemia. (1)The normal cells were selected according to the illumination. The normal organs (kidney, liver, spleen, lung, kidney, bone) of the same individual were identified by DNA staining with propidium iodide (PI), and the presence or absence of changes in color intensity between organs was discussed. The DNA Index(DI) was measured in the normal tissue and was detected in the normal tissue. (2)To investigate the establishment of the processing method of the material; to examine the solid tissue of the material; to examine the cell; to examine the dispersion of the material; to examine the dispersion of the material; and to examine the dispersion of the material. The enzyme treatment method (trypsin,pronase,collagenase,dispase) was used to detect and reconfirm the enzyme. The cell analysis method (fine cutting-treatment-fixation-X100-Denucleation-PI staining) was used to detect and reconfirm the enzyme. (3)To investigate the preservation method of the material; to compare the DI of fresh material and frozen material of the same individual (i.e., sample), and to analyze the possibility of such a change. (4)Establishment of operation method; dyeing conditions (PI, 50μ M 10 min) and operation conditions of the machine (output: combination of light sensitivity) are discussed, and actual analysis is possible. (5) The standard value of DNA Index is set up; the predetermined number is reached, and the current reference is in the middle of the discussion. (Note)DNA Index is <TM>a new product developed by EXALPHA. In February of this year, we started with (2),(3) and (4) and obtained good results from the comparison and discussion. Simplification and standardization of model processing, implementation of model processing, and promotion of model processing