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ウエルシュ菌エンテロトキシン蛋白分子上における下痢作用部位の解析

产气荚膜梭菌肠毒素蛋白分子腹泻作用位点分析

基本信息

批准号：
62560296
负责人：
植村興
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ウエルシュ菌エンテロトキシンに対するモノクローナル抗体の調整精製エンテロトキシンの免疫で4種類のハイブリドーマを得, マウス腹腔に戻し, 得られた腹水からDEAE-Affi-Gel-Blue(Bio-Rad)クロマトグラフィーでモノクローナル抗体を調整した.2.ウエルシュ菌エンテロトキシンの化学修飾剤による切断と毒素フラグメントの分取及び得たフラグメントの1, 2の物理化学的性状分析精製エンテロトキシンを0.2MDTT, 0.5M2-ニトロー54オシアノ安息香酸(NTCB)及び4Mグアニジンを含む0.05M Tris-HCl緩衝液(pH8.0)中で15分間室温に放置し, SH基をシアノ化した. pHを9.0に修正後, さらに6時間37°Cで反応させた. 切断反応は0.02M Tris-HCl緩衝液(pH8.0)に透析することにより停止させた. 切断毒素フラグメントの精製は, 0.02M Tris-HCl緩衝液(pH8.0)で平衡化させたDEAE-Sephacel(Pharmdcia)カラムに吸着させ, 0.05M塩化ナトリウム濃度勾配で溶出して得た. 精製フラグメントはSDS-PAGEで解析の結果分子量15,000(エトテロトキシン全分子は35,000)で, ショ糖密度勾配等電点電気泳動で分析の結果, 等電点5.58(同4.3)であった.3.フラグメントのエンテロトキシン作用における役割りの解析:^<125>I標識フラグメントを用いた分析の結果, フラグメントはエンテロトキシン作用の第一段階である細胞への結合性を保持していることが確認された. しかし第二段階である毒性は, Vero細胞から^<51>Cr及び^<86>Rb放出活性で調べた結果, フラグメントには, エンテロトキシンと異って, 認められなかった. 第二段階の毒性を有する分子は単離されておらず, 今後の課題として残されている.

1. The regulation and purification of the antibody of the bacteria and the immune system of the 4 kinds of bacteria and the immune system of the abdominal cavity DEAE-Affi-Gel-Blue(Bio-Rad) was obtained by adjusting the antibody to DEAE-Affi-Gel-Blue(Bio-Rad). 2. Chemical modification of DEAE-Affi-Gel-Blue (Bio-Rad) was carried out by chemical modification of DEAE-Affi-Gel-Blue(Bio-Rad). 0.5M 2-nitrobenzoic acid (NTCB) and 4M Tris-HCl buffer solution (pH 8.0) for 15 minutes at room temperature, SH group was removed from the solution. After pH 9.0 correction, 6 hours later 37°C. Cut off the reaction and stop dialysis with 0.02M Tris-HCl buffer (pH 8.0). The purification of the toxin was carried out in 0.02M Tris-HCl buffer (pH 8.0) and the equilibration was carried out in DEAE-Sephacel(Pharmdcia). SDS-PAGE analysis results of molecular weight 15,000(total molecule 35,000), sugar density, isoelectric point 5.58(same as 4.3), isoelectric point 5.58<125>In the second stage of toxicity, Vero cells released <51>Cr and <86>Rb, and the results showed that Cr and Rb were released from Vero cells. The second order toxicity of the molecule is isolated, and future problems are discussed.