アンチセンスオリゴ法によるHTLV-I関連疾患に対する遺伝子調節治療法の開発

利用反义寡核苷酸方法开发HTLV-I相关疾病的基因调控疗法

• 批准号: 06670171
• 负责人: 北島 勲
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670171/
• 关键词: 成人T細胞白血病; 関節炎; HTLV-I tax; NF-kB; アンチセンスオリゴ; 遺伝子治療

(1)アンチセンスオリゴの合成:HTLV-I tax蛋白翻訳開始部分を標的としたアンチセンスオリゴマー(AS・tax)とそのセンスを合成し、われわれが報告した方法(J.Bion.Chem.267,25881,1992)に基づき3'末より3塩基をホスフォロチオエ-ト化した。また同方法を用い核内転写因子NF-kB p65に対するアンチセンス核酸(AS・NF-kB)も合成した。(2)アンチセンスtax,NF-kBによるHTLV-I産生細胞株(MT-2)の細胞増殖に与える影響:(1)により合成したAS・tax,AS・NF-kBをMT-2細胞に投与した。アンチセンスの蛋白抑制効果はtaxに対する抗体を用いたウエスタンブロットにより最高80%の抑制,NF-kBはゲルシフトアッセイにより88%の抑制に成功した。しかし、MT-2細胞増殖はAS-taxでは変化がなく、AS・NF-kBにより投与量に比例して抑制され最大70%の増殖抑制が認められた。(3)HTLV-I関連疾患への応用:HTLV-I関連疾患のうち、HTLV-I型関節症(HAAP)の患者より得られた培養tax発現滑膜細胞にAS・taxを投与した。8日間の投与によりAS・taxは投与2日目より滑膜細胞の形態変化を誘導し3日目より明らかに有為な増殖抑制効果が確認できた(第15回国際臨床免疫学会、ストックホルム、1994年6月学会発表;臨床免疫 27,153,1995,J.Clin.Invest.投稿中)。(4)AS・NF-kBの臨床への応用検討:炎症性サイトカインによりNF-kB活性が誘導されることが知られているが今回、われわれはトロンビン刺激によってもその活性が高められることを明らかにした。このトロンビン刺激によるNF-kBの活性はAS・NF-kBにより先のレベルにまで低下させることを見い出し報告した(Biochem.Biophys.Res.Commu.204,950,1994)。以上、HAAPの滑膜細胞、HTLV-I感染T細胞などHTLV-I tax発現により高められたNF-kBの活性化をAS・NF-kBにより抑制できる可能性が見い出され、この成果は将来のHTLV-I感染症遺伝子治療に利用できる可能性が考えられた。

(1) reverse transcriptional synthesis: the beginning of the HTLV-I tax protein flip-flop, the first part of the AS protein was analyzed by the AS tax method, and the report method (J.Bion.Chem.267, 25881, 1992) was used in the first part of the study. In the same method, the nucleic acid (AS ·NF-kB) was synthesized with the intranuclear writing factor NF-kB p65. (2) the cell colonization and the shadow of tax,NF-kB (MT-2): (1) the synthesis of AS ·tax, AS ·NF-kB and MT-2 cell. Protein inhibition, tax protein inhibition, protein inhibition The proportion of colonization, AS-tax, AS, NF-kB, dosage, inhibition, colonization, inhibition, colonization, inhibition, inhibition, (3) the patients with HTLV-I disease and HTLV- type I disease (HAAP) were treated with AS tax synovium, and the synovial cells were injected into synovium. In the 8th, the AS ·tax was invested in the synovium for 8 days and the synovium was monitored in the 2nd. In the 3rd day, the results of colonization inhibition were confirmed. (the 15th returned to the International Society of Immunology, June 1994, and bed immunity 27353, 1995, J. Clin. install. In the contribution). (4) AS ·NF-kB clinical use: inflammatory response (NF-kB) activity guide (NF-kB activity) to know how to treat the disease. This time, the response was stimulated by high activity. Please stimulate the activity of NF-kB, AS NF-kB, first, lower, report, report (Biochem.Biophys.Res.Commu.204,950,1994). The above, HAAP synovial cells, HTLV-I infection T cells, HTLV-I tax cells, NF-kB activation, AS NF-kB activation, inhibition, possibility, outcome, future treatment of HTLV-I infection, the possibility of infection and the possibility of infection.

项目成果

Nakajima,T.,Kitajima,I.,et al.: "Involvement of NF-kB activation in thrombin-induced human vascular smooth muscle cell proliferation." Biochem.Biophys.Res.Commun.204. 950-955 (1994)

Nakajima,T.,Kitajima,I.,et al.：“NF-kB 激活参与凝血酶诱导的人血管平滑肌细胞增殖。”

Kitajima,I.,Shinohara,T.,et al.: "Ablation of transplanted HTLV-I tax transformed tumors in mice by antisense inhibition of NF-kB." Science. 258. 1792-1794 (1992)

Kitajima,I.,Shinohara,T.,et al.：“通过反义抑制 NF-kB 消融小鼠体内移植的 HTLV-Itax 转化肿瘤。”

Kitajima,I.,Shinohara,T.,et al.: "Human T cell leukemia virus type I tax transformation in associated with increased uptake of oligodeoxynucleotides in vitro and in vivo." J.Biol.Chem.267. 25881-25888 (1992)

Kitajima,I.,Shinohara,T.,et al.：“人类 T 细胞白血病病毒 I 型转化与体内和体外寡脱氧核苷酸的摄取增加有关。”

Xu,X.,Kitajima,I.,et al.: "Transcriptional suppression of human T-cell leukemia virus type I long terminal repeat occurs by an unconventional interaction of a CREB factor with R resion." Mol.Cell.Biol.14. 5371-5383 (1994)

Xu,X.,Kitajima,I.,et al.：“人类 T 细胞白血病病毒 I 型长末端重复的转录抑制是通过 CREB ​​因子与 R 片段的非常规相互作用而发生的。”

北島 勲: "アンチセンス核酸を利用したトランスジェニックマウスの発癌抑制" 細胞工学. 13. 57-66 (1994)

Isao Kitajima：“使用反义核酸抑制转基因小鼠的致癌作用”《细胞工程》13. 57-66 (1994)。