ミトコンドリアDNA塩基配列から見た日本産肺吸虫属内の分子系統類縁関係

从线粒体 DNA 序列观察日本肺吸虫属内的分子系统发育关系

• 批准号: 06670261
• 负责人: 吾妻 健
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670261/
• 关键词: ミトコンドリアDNA; PCR; 塩基配列; 肺吸虫; 系統樹

日本産肺吸虫類の系統類縁関係については、まだ不明な点が多い。本研究では、進化の速度が速く、しかも母性遺伝する、ミトコンドリアDNAの塩基配列を用いて、可能な日本産肺吸虫の系統樹の作成を試みた。今回使用した種類は、ウエステルマン肺吸虫(対馬産:3倍体)、宮崎肺吸虫(南国産)、大平肺吸虫(城崎産)、佐渡肺吸虫(佐渡産)の4種である。まず、各サンプルは、TEバッファーでホモジナイズし、フェノール/クロロフォルムで2回、クロロフォルムで1回処理した後、エタノール沈殿により、DNAを回収した。回収したDNAはテンプレートとして、PCRを行なった。プライマーは、5′-TTT TTT GGG CAT CCT GAG GTT T-3′及び5′-TAA AGA AAG AAC ATA ATG AAA AT-3′である。PCRの条件は、95℃ 1分、50℃ 1分、72℃ 3分、30サイクルである。増幅したDNA断片はチトクロームCオキシダーゼサブユニットI(COI)領域の395ベースペアである。各増幅断片はpGem系のTAベクターにクローニングし、各種ごとに3クローンづつシーケンスを行なった。シーケンスは、ABIのダイプライマー法を用いて、ABI 373Aオートシーケンサーにより行なった。系統樹の作成は、Paupの最大節約法及びClustal Vの近隣接合法を用いて行なった。その結果、2つの異なる方法とも同じ結論に達した。即ち、大平肺吸虫と佐渡肺吸虫が一つのクラスターを形成し、次に宮崎肺吸虫がそのクラスターといっしょになり、ウエステルマン肺吸虫は、一番離れたグループであることが分かった。この結果はアイソザイム分析の結果と一致した。

The phylogeny of the Japanese pulmonary fluke class is に, に, て,, and there are many な points が of unknown origin. This study で は, evolution の speed が speed く, し か も maternal heritage 伝 す る, ミ ト コ ン ド リ ア DNA の salt base matched with column を い て, possible な Japanese lung trematode の system tree の made を try み た. Today back to use し type た は, ウ エ ス テ ル マ ン lung trematode (horse seaborne production: 3 times), miyazaki lung trematode (domestic), Pacific lung trematode battery production (city), sado lung trematode sado (produce) の four で あ る. ま ず, various サ ン プ ル は, TE バ ッ フ ァ ー で ホ モ ジ ナ イ ズ し, フ ェ ノ ー ル / ク ロ ロ フ ォ ル ム で 2 back, ク ロ ロ フ ォ ル ム で 1 back 処 Richard し た, エ タ ノ ー ル Shen Dian に よ り, DNA を back 収 し た. Return た たDNA テ テ プレ プレ トと トと て て て, PCRを lines なった. Youdaoplaceholder0 プラ プラ プラ プラ プラ プラ, 5 '-TTT TTT GGG CAT CCT GAG GTT T-3' and び5 '-TAA AGA AAG AAC ATA ATG AAA AT-3' である. PCR assay conditions: サ, 95 ° C for 1 minute, 50 ° c for 1 minute, 72 ° c for 3 minutes, 30サ である である である である である である である. Good picture し た DNA fragment は チ ト ク ロ ー ム C オ キ シ ダ ー ゼ サ ブ ユ ニ ッ ト I (COI) field の 395 ベ ー ス ペ ア で あ る. The rights of fragment は pGem is の TA ベ ク タ ー に ク ロ ー ニ ン グ し, various ご と に 3 ク ロ ー ン づ つ シ ー ケ ン ス を line な っ た. シ ー ケ ン ス は, ABI の ダ イ プ ラ イ マ を ー method with い て, ABI 373 a オ ー ト シ ー ケ ン サ ー に よ り line な っ た. The system tree <s:1> can be made into び, the maximum saving method of Paup and the nearly 隣 connection method of びClustal V <e:1>. Youdaoplaceholder2 uses the て て line なった. The results of そ そ, the results of 2 are different from those of the なる method と そ and the じ conclusion に reach た た. Namely ち, Pacific lung trematode と sado lung trematode が a つ の ク ラ ス タ ー を し, time に miyazaki lung trematode が そ の ク ラ ス タ ー と い っ し ょ に な り, ウ エ ス テ ル マ ン lung trematode は, a れ た グ ル ー プ で あ る こ と が points か っ た. The <s:1> <s:1> results ア ア ソザ ソザ ム ム analysis と results と consistent <s:1> た.

项目成果

T.AGATSUMA et al.: "Mitochondrial DNA differentcation of Japanese diploidandtriploid.Paragonimus." Journal of Helminthology. 68. 7-11 (1994)

T.AGATSUMA 等人：“日本二倍体和三倍体并殖吸虫的线粒体 DNA 分化。”