可溶性低分子食物繊維の免疫化学的測定法の開発

可溶性低分子膳食纤维免疫化学测定方法的建立

• 批准号: 06670445
• 负责人: 住本 建夫
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670445/
• 关键词: 可溶性食物繊維; ポリデキストロース; 免疫化学的測定法

可溶性低分子食物繊維として食品に添加されているポリデキストロース(合成多塘類)の免疫化学的測定法の開発を以下の実験計画により試みた。1)ポリデキストロースの物理化学的性状ポリデキストロースはブドウ塘、ソルビトール、およびクエン酸の割合を89:10:1で混合し、高温高真空下で重合させた合成多塘類である。その基本構造はブドウ塘のランダムな結合からなっている。ブドウ塘の1→2、1→3、1→4、1→6結合などを含む多くの結合様式から成っていると考えられる。今回使用した市販のポリデキストロースは平均分子量が約1,000(Superdex30pgによる分子濾過法による)であった。2)免疫原および抗原の作製ポリデキストロースの平均分子量が約4,000分画を過ヨウ素酸で酸化し、これに蛋白質(免疫原にはHuman IgGに,抗原にはBovine serum albuminに)を加えてシッフ塩基を作り、さらにNaBH_4で還元してポリデキストロース-蛋白質複合体を作製した。3)免疫、細胞融合、およびモノクロナール抗体の作製6週齡のマウス(♀、Balb/c)にComplete Freund's Adjuvantと共に免疫原を腹腔内に投与した。5週間後に抗原のみで再度免疫し、3日後に免疫した脾細胞を取り出しX63-Ag8-6.5.3細胞とポリエチレングリコール(MW=1,500)を用いて細胞融合を行った。現在モノクロナール抗体のスクリーニング中である。4)測定系の作製ポリデキストロースを測定するためには結合様式特異的な抗体を用いたサンドイッチアッセイ法が最適であると考えられる。特に二次抗体としては特異性の低い物が好都合であるので、その一例としてα-D-Glucに親和性を持つConAが使用できるかでうかを検討した。現在モノクロナール抗体を一次抗体としたサンドイッチアッセイ法による測定系を検討中である。5)いろいろな食品に添加されているポリデキストロースの測定上記の測定系を使用して、いろいろな食品に添加されているポリデキストロースの測定を計画中である。

Development of an Immunochemical Assay for Soluble Low Molecular Weight Food Additives (Synthetic Polypeptides) 1) Physical and chemical properties of the mixture, mixing, high temperature and high vacuum, mixing, mixing, The basic structure of the structure is to combine the structure of the structure with the structure of the structure. 1→2, 1→3, 1→4, 1→6 Combination of two or more combinations The average molecular weight of this product is about 1,000(Superdex30pg). 2)The average molecular weight of the immunogen and antigen is about 4,000 minutes, and the protein (for Human IgG, the antigen is Bovine serum albumin) is added to the protein complex, and NaBH_4 is added to the protein complex. 3)Immunization, cell fusion, and preparation of antibodies at 6 weeks of age. Complete Freund's Adjuvant and Immunogen administered intraperitoneally. After 5 weeks, the antigen was re-immunized, and after 3 days, the spleen cells were isolated from X63-Ag8 -6.5.3 cells and fused with the cells. Now, you can see the difference between the two. 4)The method of determination is optimal. In particular, secondary antibodies have low specificity and affinity for α-D-Gluc. Now, the primary antibody is detected in the assay system. 5) The above-mentioned measurement system will be used for the determination of policostat added to foods, and the determination of policostat added to foods will be planned.