口腔類上皮癌KB細胞の産生する新しいTIMPの構造解析

口腔上皮样癌KB细胞产生的新型TIMP的结构分析

• 批准号: 06671873
• 负责人: 来住 準一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671873/
• 关键词: KB細胞; TIMP-1; TIMP-2

ヒト口腔類上皮癌KB細胞培養液中に産生されるコラゲナーゼ阻害活性のうちTIMP-1を抗TIMP-1免疫吸着カラムで除去後、さらに残存するコラゲナーゼ阻害活性をSDS-PAGEで単一蛋白バンドとなるまで精製した。精製標品はコラゲナーゼの他ゼラチナーゼ、ストロムライシンをも阻害することからTIMPファミリーに属する蛋白と考えられた。(以下KB-TIMPと略す)。SDS-PAGE後PVDF膜へのウエスタンブロットを行ない、蛋白バンドを切り出しアミノ酸配列解析を行なったところ、TIMP-2のそれと一致した。しかし、その分子量はTIMP-2より約数kDa小さく、またTIMP-2は糖鎖を持たない事実からKB-TIMPはTIMP-2の低分子化したものと考えられた。TIMP-2はその性質としてプロゼラチナーゼAと複合体を形成し、その結合にはC末端から9個のペプチドが必須である。KB-TIMPをプロゼラチナーゼAと混ぜ、複合体形成をゼラチン-セファロースカラムで分析したところ、TIMP-2と異なり複合体を形成しなかった。またKB-TIMPおよびTIMP-2をトリプシン、V8プロテアーゼで分解し、その断片を比較検討したが、明かな違いを認めなかった。またTIMP-2のC末端から19個のペプチドに対し作成したポリクロナール抗体と反応した。これらの結果は、KB-TIMPはTIMP-2のC末端から多くとも9つのアミノ酸ペプチドがタンパク分解あるいは遺伝子欠損により消失したものである可能性を示唆している。

In the cell culture solution of oral epithelial cancer KB, the anti-TIMP-1 immunoabsorption activity was detected by TIMP-1 assay. After removal, the residual cell culture activity was determined by SDS-PAGE assay. The standard product, TIMP, protein, protein and protein. (the following KB-TIMP outline). After SDS-PAGE, the PVDF membrane, protein, protein, acid, acid, and TIMP-2 were analyzed. The molecular weight, the molecular weight, the TIMP-2, the kDa, the TIMP-2, the sugar, the KB-TIMP, the TIMP-2, the low molecular weight, the molecular weight, the molecular weight, the It is necessary for TIMP-2 to form and combine the 9 copies of the C-terminal complex. The KB-TIMP virus was mixed and the copy was formed. The complex was analyzed, and the TIMP-2 complex was formed. "KB-TIMP", "TIMP-2", "decompose", "fragment", "break", "clear", "break", "break" and "break". At the C-end of the TIMP-2, 19 antigens were made into anti-virus antibodies. The results showed that the KB-TIMP TIMP-2 C-terminus showed that there was a lot of acid in the C-terminal, and that the possibility of disappearing was not clear.