Campylobacter rectus の表層タンパクの遺伝子解析

直肠弯曲杆菌表面蛋白的遗传分析

• 批准号: 06671910
• 负责人: 宮本 学
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671910/
• 关键词: Campvlobacter rectus; S-layer; 表層タンパク質

1.C.rectus 遺伝子の塩基配列の解析クローニングしたC.rectus ATCC33238株のS-layer 遺伝子クローンのインサートDNAを、塩基配列の解読に供した。その結果このクローンのインサートにこの蛋白質遺伝子に相当するオープンリーディングフレームが存在した。全塩基配列は、いまだ解読されていない。しかしながら、解読した範囲の塩基配列に対応するアミノ酸配列より、蛋白質のN末端側の配列は,C.rectusから抽出精製したS-layer蛋白質のものと一致した。さらに、この配列はGillespieらが報告した C.rectusの培養上清から精製した細胞毒素のそれと一致した。つまり、最表層に存在するこの蛋白質が培養液に混入し、しかもこの蛋白質が細胞毒素を有している可能性が生まれた。そこで、S-layer蛋白質の細胞毒性を検討する実験系の必要が生じた。なお解読した範囲での遺伝子の塩基配列と、すでに報告されている数値の細菌毒素の遺伝子(Escherichia coliのhemolisin 遺伝子など)との相同性を解析したが、特に相同性が高い部位はなかった。2.S-layer 蛋白質発現系の検討S-layer 蛋白質は,C.rectus菌体から酸抽出法により簡易精製可能であるが、この抽出処理は蛋白質を酸にさらすために蛋白質本来がもつ生物学的特徴が失われている可能性がある。そこで遺伝子組み換え法により、この蛋白質を大量発現するクローンを作製し大腸菌に直接発現することを試みた。S-layer遺伝子をlacZ promoter 下流に組み込み、これを活性化することにより,S-layer蛋白質大量発現クローンを樹立した。今後遺伝子の全塩基配列の解明と,S-layer蛋白質大量発現クローンを利用して、この蛋白質が細胞毒性について検討する予定である。

1.C.rectus S-layer of ATCC33238 strain The remaining DNA is the DNA of the child, and the solution of the base arrangement is the supply of the DNA.そのRESULTS It's quite a good thing. The whole base arrangement is は, いまだ解読されていない. The N-terminal side of the protein, the N-terminal side of the protein C.rectus extracts the refined S-layer protein.さらに、このalignmentはGillespieらがreportした C.rectusのculture supernatantからrefinedしたcytotoxicのそれとconsistentした. There is no protein in the surface layer, and there is no possibility that the culture medium is mixed with the protein, and there is no possibility that the cytotoxin will be raw.そこで、S-layer protein's cytotoxicity is necessary and it is necessary to be healthy. Escherichia coli のhemolisin The remaining parts are the same as the analysis of the sameness, and the characteristics of the sameness are the high parts. 2.S-layer Protein-based S-layer Protein, C.rectus bacteria, acid extraction method, simple purification, extraction processing The protein is acidic and the protein is originally a biological characteristic and the possibility is lost. The そこで缝子组みchangeえ法により, このproteinをa large number of 発appears するクローンをproduces しcoliform にdirect 発appears することをtest みた. The S-layer residue is lacZ promoter, the downstream activation group is active, and the S-layer protein is present in large amounts and is established. In the future, it will be clarified that the whole chelation of S-layer proteins will be realized, and the use of S-layer proteins in large quantities will be determined.