イソプレノイドによる修飾蛋白質生合成系の解明

类异戊二烯修饰的蛋白质生物合成系统的阐明

• 批准号: 06680602
• 负责人: 佐上 博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680602/
• 关键词: プレニル化蛋白質; イソプレノイド修飾蛋白質; イソプレノイド; ゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素; ファルネシル二リン酸合成酵素; プレニルトランスフェラーゼ

Ras蛋白質をはじめとするイソプレノイド修飾蛋白質が機能するためには、そのイソプレニル化が必須である。それゆえ、そのイソプレニル化脂質、ファルネシル二リン酸(FPP)とゲラニルゲラニル二リン酸(GGPP)がどのように生合成されるのかを理解することにより、イソプレノイド修飾蛋白質を介した細胞増殖、分化、細胞骨格、細胞運動、食作用、細胞内の蛋白質輸送などの機能調節の解明が期待される。この研究目的をふまえて、今年度行った研究の成果を以下に示す。1.ポリクローナル抗体作成FPP合成酵素とGGPP合成酵素を多量(1mg)に得るために、ゲラニルメチルホスホノホスフェートあるいはファルネシルメチルホスホノホスフェートをリガントするアフィゲル10をそれぞれ10ml合成した。ウシの大脳(約3kg)を用いて一段階の精製法により、現在FPP合成酵素を500μgそしてGGPP合成酵素2mgを得ている。MonoQクロマトグラフィーによる更なる精製により、目的とするポリクローナ抗体作成が可能になると思われる。2.GGPP合成酵素のクローニングスラブ電気泳動法において精製GGPP合成酵素に相当する蛋白バンドを切り出し、そのプロテアーゼ消化によって得られる部分ペプタイドアミノ酸配列を決定した。(1)KAYK(2)KHLSK(3)KMFK(4)KTQETVQGILXEPY(5)KQISARGGNPXGPである。これを基に、KHLSKとQET-VQに相当するオリゴヌクレオチドを合成した。ウシ大脳よりmRNAを調製し、PCRによる増幅反応をおこなった。その結果200bpに相当するPCR産物を同定することができた。このプローブを用いてGGPP合成酵素のクローニングが容易になると思われる。

Ras protein, protein and protein. The synthesis of maleic acid (FPP), maleic acid (GGPP), maleic acid (Ligusticum), phosphoenolipid (Lactobacillus), phagocytic acid, biosynthesis, phagocytic acid, phagocytosis, phagocytic acid, phagocytic acid, phagocytic acid The intracellular protein can be delivered to the host machine to understand how much you expect. The purpose of the study is to show that the results of the research are listed below. 1. The antibody was used to make FPP synthesis enzyme. GGPP synthesis enzyme (1mg) was obtained in a large amount (1mg). 10ml synthesis was detected in 10 samples. The FPP synthesis enzyme 500 μ g FPP synthesis enzyme 2mg was obtained by means of one-stage purification method. MonoQ said that it is possible to make antibodies that can be used to improve the quality of the antibody. The 2.GGPP synthesis enzyme was analyzed by electrophoretic electrophoretic analysis. The GGPP synthesis enzyme was determined by protein digestion and digestion. (1) KAYK (2) KHLSK (3) KMFK (4) KTQETVQGILXEPY (5) KQISARGGNPXGP flooding. The QET-VQ of KHLSKG is quite similar to that of QET and QET. The big picture is mRNA, the PCR is full, and the frame is negative. The results show that the 200bp results are similar to those of the PCR. It is easy to use the GGPP synthesis enzyme to think about it.

项目成果

H.Inoue et al.: "Phosphoryration of Farnesol by a Cell-free System from Botryococcus Braunii" Biochem.Biophys.Res.Commum.200. 1036-1041 (1994)

H.Inoue 等人：“来自布氏葡萄球菌的无细胞系统对金合欢醇的磷酸化”Biochem.Biophys.Res.Commum.200。

H.Sagami et al.: "Purification and Properties of Geranylgeranyl Diphosphate Synthase from Bovine Brain." J.Biol.Chem.269. 20561-20566 (1994)

H.Sagami 等人：“牛脑中香叶基香叶基二磷酸合酶的纯化和特性”。

佐上 博: "プレニル化蛋白質の発見とイソプレノイド生化学の新展開" 生化学. 12. 1488-1501 (1994)

Hiroshi Sagami：“异戊二烯化蛋白质的发现和类异戊二烯生物化学的新发展”《生物化学》12. 1488-1501 (1994)。

H.Inoue et al.: "Formation of Farnesyl Oleate and Three Other Farnesyl Fatty Acid Esters by Cell-free Extracts from Botryococcus Braunii B Race" Phytochemistry. 36. 1203-1207 (1994)

H.Inoue 等人：“通过布氏葡萄球菌 B 族的无细胞提取物形成法呢基油酸酯和其他三种法呢基脂肪酸酯”植物化学。

H.Sagami et al.: "Purification of Geranylgeranyl Diphosphate from Bovine Brain" Acta Biochim.Polonica.41. 293-302 (1994)

H.Sagami 等人：“从牛脑中纯化香叶基香叶基二磷酸”Acta Biochim.Polonica.41。