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哺乳類細胞の組換えにおけるトポイソメラーゼの関与

拓扑异构酶参与哺乳动物细胞的重组

基本信息

批准号：
06680694
负责人：
小山秀機
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、動物細胞の組換えにおけるトポイソメラーゼの関与を検討している。一昨年、CHO/APRT^-細胞にaprt遺伝子由来ベクターを導入した後、トポイソメラーゼII(topII)阻害剤で処理すると、ベクターの相同および非相同的組換えが促進される現象を見いだした。topII阻害剤には、作用の異なる3種類の薬剤が知られている。当初、VP-16とICRF-193を用いたが、今回m-AMSAで同様の効果を見いだし、促進現象がtopIIの阻害によることが明らかにした。今回、遺伝子治療への可能性を追求するため、ヒト奇形腫細胞株PA-1を細胞モデルに用いて、再検討を行った。その結果、この細胞系でも3種のtopII阻害剤で、より高い非相同組換えの促進を見いだした。特に、pSV2CATを導入しtopII阻害剤で処理したが、阻害剤処理と未処理でCATの発現量に差がなかった。この結果から、核内に取り込まれたベクターの量に差がないが、ベクターが染色体へ組込まれるステップにtopII阻害剤が作用していることが示唆される。現在、染色体に組込まれたベクターの構造、特にゲノムとベクターの接続点を解析し、topIIの認識配列との関連を調べつつある。topIIにはαとβのアイソフォームが存在する。2種のフォームの組換えおよび細胞周期における役割を直接解析するため、ジーンターゲティングにより遺伝子破壊を試みた。まず、クローン化したマウスtopIIα遺伝子を用いてターゲティングベクターを作成して、マウスES細胞に導入し、ターゲットされたクローンのスクリーニングを行っている。

We and the animals should be organized to make sure that we do not know what to do and what to do. Last year, after the CHO/ APRT^-cell aprt system was introduced into the market, it was found that II (topII) prevented the growth of the system, and that the same system had the same effect as the other. TopII is responsible for the prevention and control of the disease. In the past, VP-16 ICRF-193 was used as a tool, but this time m-AMSA is in the same position as topII to block the situation and improve it. This time, the possibility of the treatment of a child is in pursuit of a strange shape, a cell line PA-1, a cell line, and a cell line. The results showed that the cell lines were blocked by topII, and the cells were not the same as those in the same group. Special, pSV2CAT input topII hinders the management of the system, prevents the management of the CAT, and makes a difference in quantity. The results were as follows: the results showed that the results showed that the effect of topII inhibition was significantly higher than that of the control group (P < 0.05). Now, the chromosomal tissue system is in production, the special information system is in contact point analysis, and the topII information system is based on the data acquisition system. TopII, α, β, β, α, β, 2. Do you want to analyze the cell cycle data directly? do you want to analyze the data directly? Please tell me what to do with the topII alpha baby, and then use the ES cell to make it into the box.