靭帯機能を有する人工歯根膜製造技術の開発

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マウスより歯根膜細胞を採取し、この歯根膜細胞にADAMTSL6βを作用させフィブリリン-1 の再生誘導を試みた。フィブリリン-1 の再生誘導は次の2通りの方法で行なった。一 方 は 発現ベクターにより ADAMTSL6β を 過 剰 発 現させることによりフィブリリン-1 再生 を促す方法で発現誘導を行い、もう一方は組み換えタンパク ADAMTSL6βを細胞培養培地に加える方法で発現誘導を行なった。これら２つの方法によるフィブリリン-1の形成しオキシタラン線維を有する細胞株を作製した。フィブリリン－１やオキシタラン線維の形成はRT―PCR法、HE染色、免疫染色などで確認した。次に、ファイブロネクチンやゼラチン、インテグリンなど細胞表面に存在し、細胞同士の接着 に関与する分子を利用し細胞を三次元的に積み重ねる細胞積層法を応用する「Layer by Layer technique」を用いることにより、フィブリリン－１を形成した細胞を三次元的に積み重ねることを試みた。「Layer by Layer technique」は既に市販されている試薬を使用し歯根膜細胞の三次元構造構築を行なった。このようにして作製した細胞塊の立体的な機能評価に関して、次の２つの方法で解析した。１つ目は、立体的に培養された歯根膜細胞に関してオキシタラン線維を再構築しているかを組織学的に解析を行なった。２つ目は 機能的なオキシタラン線維を再構築しているかを、位相差顕微鏡を用いた live imaging による細胞の引っ 張り試験で解析を行なった。