靭帯機能を有する人工歯根膜再生技術の開発

具有韧带功能的人工牙周膜再生技术的开发

• 批准号: 16K20664
• 负责人: 二木 正晴
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20664/
• 关键词: ADAMTSL6β; フィブリリン-1; オキシタラン線維; 細胞積層法; Layer by Layer technique; 歯根膜細胞; 靭帯機能; 三次元培養; ECM補充療法; Layer by Layer

まずマウスの歯根より採取した歯根膜細胞にADAMTSL6βを作用させフィブリリン-1 の発現を促した。ADAMTSL6βによるフィブリリン-1 の誘導は以下の2通りの方法で行なった。一方は発現ベクターにより ADAMTSL6β を 過 剰 発 現させることによりフィブリリン-1 再生 を促す方法で行い、もう一方は組み換えタンパク ADAMTSL6βを細胞培養培地に加える方法 で行なった。フィブリリン-1の形成は RT-PCR、HE 染色、免疫染色で確認を行なったところ、フィブリリン-1の形成が確認された。これら2つの方法でフ ィブリリン-1 を再生させることにより、 口腔内で歯の弾性機能を担う歯根膜の微細線維で、その主成分で あるオキシタラン線維を有する細胞株を目指した。オキシタラン線維の形成は RT-PCR、HE 染色、免疫染色で確認を行いその発現が確認された。これらの細胞にファイブロネクチンやゼラチン、インテグリンなど細胞表面に存在し、細胞同士の接着に関与する分子を利用することで細胞を三次元的に積み重ねる「細胞積層法」を応用する「Layer by Layer technique」を用いることにより、ADAMTSL6βによりフィブリリン-1 を形成した細胞を層状に積み重ね in vitro で三次元的にオキシタラ ン線維を有する人工歯根膜を作製することを試みた。上記の方法で作製した 三次元立体構造を持つ細胞塊がADAMTSL6βによりフィブリリン-1 を再生しこれによりオキシタラン線維を形成し人工的に歯根膜が形成されているかの機能 評価を行うため、Periomedatabase に登録されている歯根膜特異的に発現する遺伝子群の発現を realtime PCR 法 で解析を行った。現在そのデータを解析中である。

ADAMTSL6β is used to promote the development of adrenocortical cells. ADAMTSL6β-1 A method for promoting the regeneration of ADAMTSL 6β in cell culture was developed. RT-PCR, HE staining and immunostaining were used to confirm the formation of BSP-1. 2. Methods for cell line regeneration: The oral cavity has the function of supporting the fine line of the dental root membrane, and the main components of the oral cavity have the function of supporting the fine line of the dental root membrane. The formation of the protein was confirmed by RT-PCR, HE staining and immunostaining. The cell layer technique is used in the presence of molecules on the cell surface, in the presence of molecules on the cell surface, and in the presence of molecules on the cell surface. ADAMTSL6β-cell layer-by-layer deposition in vitro, three-dimensional layer-by-layer deposition in vitro, and artificial root membrane formation. The method described above was used to construct three-dimensional three-dimensional structure of cell blocks from ADAMTSL6β to ADAMTSL6 β. Now, we're going to analyze it.