靭帯機能を有する人工歯根膜再生技術の開発

具有韧带功能的人工牙周膜再生技术的开发

• 批准号: 16K20664
• 负责人: 二木 正晴
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20664/
• 关键词: ADAMTSL6β; フィブリリン-1; オキシタラン線維; 細胞積層法; Layer by Layer technique; 歯根膜細胞; 靭帯機能; 三次元培養; ECM補充療法; Layer by Layer

まずマウスの歯根より採取した歯根膜細胞にADAMTSL6βを作用させフィブリリン-1 の発現を促した。ADAMTSL6βによるフィブリリン-1 の誘導は以下の2通りの方法で行なった。一方は発現ベクターにより ADAMTSL6β を 過 剰 発 現させることによりフィブリリン-1 再生 を促す方法で行い、もう一方は組み換えタンパク ADAMTSL6βを細胞培養培地に加える方法 で行なった。フィブリリン-1の形成は RT-PCR、HE 染色、免疫染色で確認を行なったところ、フィブリリン-1の形成が確認された。これら2つの方法でフ ィブリリン-1 を再生させることにより、 口腔内で歯の弾性機能を担う歯根膜の微細線維で、その主成分で あるオキシタラン線維を有する細胞株を目指した。オキシタラン線維の形成は RT-PCR、HE 染色、免疫染色で確認を行いその発現が確認された。これらの細胞にファイブロネクチンやゼラチン、インテグリンなど細胞表面に存在し、細胞同士の接着に関与する分子を利用することで細胞を三次元的に積み重ねる「細胞積層法」を応用する「Layer by Layer technique」を用いることにより、ADAMTSL6βによりフィブリリン-1 を形成した細胞を層状に積み重ね in vitro で三次元的にオキシタラ ン線維を有する人工歯根膜を作製することを試みた。上記の方法で作製した 三次元立体構造を持つ細胞塊がADAMTSL6βによりフィブリリン-1 を再生しこれによりオキシタラン線維を形成し人工的に歯根膜が形成されているかの機能 評価を行うため、Periomedatabase に登録されている歯根膜特異的に発現する遺伝子群の発現を realtime PCR 法 で解析を行った。現在そのデータを解析中である。

首先，用ADAMTSL6β处理从小鼠根部收集的牙周韧带细胞，以刺激纤维蛋白-1的表达。通过ADAMTSL6β诱导纤维蛋白-1的诱导以两种方式进行：一种是通过用表达载体过度表达ADAMTSL6β来促进Fibrillin-1再生进行的，另一种是通过将重组蛋白ADAMTSL6β添加到细胞培养基中来进行。 RT-PCR，染色和免疫染色证实了原纤维素-1的形成，并确认了纤维蛋白-1的形成。通过使用这两种方法再生纤维蛋白-1，我们旨在与牙周韧带的主要成分（牙周韧带的主要成分）创建细胞系，这是牙周韧带的细纤维，这是口腔腔中牙齿的弹性功能。 RT-PCR，染色并进行免疫染色以确认其表达，证实了氧纤维的形成。通过使用使用“细胞堆叠方法”的“逐层技术”，该方法使用“细胞堆叠方法”，该方法使用“细胞堆叠方法”，该方法使用“细胞堆叠方法”，该方法使用“细胞堆叠方法”，该方法使用ADAMTSL6β形成的ADAMTSL6-β形成的Fibrillin-Fibrillin-1分层细胞通过在人工中堆叠式的ligal ligartiment，我们尝试在人工中堆叠，我们尝试使用人工，我们尝试使用人工，我们尝试使用人工含量，我们尝试使用人工含量，我们尝试使用人工含量。 方式。通过使用上述方法产生的三维结构评估细胞质量的功能，该方法通过ADAMTSL6β再生纤维蛋白-1，从而形成了Oxalan纤维，并人为地形成了牙周韧带，我们分析了牙周韧带的表达，专门表达了使用RealomEdataTabase PerememeDatabase Premomedatabase的牙周表达的基因。目前正在分析数据。