簡便で高効率な新規ゲノム編集技術の開発

开发新型简单高效的基因组编辑技术

基本信息

批准号：
15H06239
负责人：
泰松清人
金额：
$ 1.75万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-08-28 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06239/
关键词：
CRISPR/Cas9 ゲノム編集 Precise knock-in 変異体作成ゼブラフィッシュ

项目摘要

本研究の目的は、改良を加えたゲノム編集技術CRISPR/Cas9システムを用い内在性遺伝子の破壊および外来遺伝子への置換を、簡便に効率良く遂行できる新しい動物実験解析技術を開発することである。研究代表者は当該年度において、CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9 (CRISPR associated protein 9 nuclease) システムにより標的ゲノム配列にDNA二本鎖切断を誘導し、修復過程の高頻度なエラーにより標的ゲノム配列に変異を導入する従来のノックアウト法を改良し、簡便かつ高効率な新しいノックアウト法をゼブラフィッシュを用いて構築した。新手法は、crRNA(CRISPR RNA)、tracrRNA(trans activating crRNA)と精製したCas9タンパク質を用いることで簡便化と高効率化を達成しており、広範な生物種において利用可能であるため、ゲノム編集技術を一層発展させ利用拡大に貢献するものである。また、研究代表者は新手法のノックイン技術への応用により未解析遺伝子epdr1座位へのレポーター遺伝子のノックインを行い、遺伝子破壊の表現型の観察と標的遺伝子発現細胞の動態解析が可能な系統を樹立し、未解析遺伝子epdr1の働きの一端を明らかにした。本ノックイン手法はこのように、遺伝子破壊の表現型解析と発現動態解析を同時に行うことができ、未解析遺伝子の機能解析に有用であることから、今後遺伝子機能の解析に盛んに用いられるようになると期待される。

这项研究的目的是开发一种新的动物实验分析技术，该技术可以使用改进的基因组编辑技术CRISPR/CAS9系统轻松有效地使用外源基因进行内源基因和替代。在今年，主要研究者使用CRISPR（群集定期间隔短的短文重复序列）/CAS9（CRISPR相关的蛋白9核酸酶）系统诱导目标基因组序列中的DNA双链断裂，并通过将突变引起的较高的算体序列，并在高度构建中，并在高度上引入了Reppy Ordor，并在高度构建了Repry Ordor中，并改善了在高频率中，并提高了一种简单的敲除方法，并构建了一种修复方法，并构建了一种方法，并构建了一种修复方法，并构建了一种方法。斑马鱼。这种新方法通过使用CRRNA（CRISPR RNA），tracrrna（反式激活CRRNA）和纯化的Cas9蛋白来实现简化和效率，并在广泛的生物体中使用，使其更加先进，并有助于基因组编辑技术的扩展。此外，通过应用一种新方法来进行敲门技术，研究人员在未分析的EPDR1基因座上敲击了记者基因，建立了一个谱系，可以观察基因破坏表型和靶基因表达细胞动力学的分析，从而揭示了未纳分析EPDR1基因的功能的一部分。这种敲入方法可以同时分析基因破坏表型和表达动力学，并且可用于对单位基因的功能分析，因此预计将来它将在对基因功能的分析中流行。