次世代型ゲノム編集技術ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を用いた低分子量タンパク質の機能解析

使用下一代基因组编辑技术 CRISPR/Cas9 对低分子量蛋白质进行功能分析

基本信息

批准号：
16J09337
负责人：
泰松清人
金额：
$ 2.08万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J09337/
关键词：
ゼブラフィッシュゲノム編集 CRISPR/Cas9 ノックイン低分子量タンパク質

项目摘要

CRISPR/Cas9による座位特異的ノックインにより、標的遺伝子座位にレポーター遺伝子をノックインし、標的遺伝子の発現をモニターしつつ、ホモ接合体を作製し変異体の表現型を観察することが本来の本研究の目的であった。しかし、レポーター遺伝子のノックインはF0世代では成功したものの、F1世代を得ることは出来なかった。そのため、当該年度より、ノックイン系統作成の過程で得られたcart like遺伝子およびslurp-like遺伝子の変異体系統の表現型解析を行っていた。これらの標的遺伝子とそのファミリー遺伝子をクローニングし、その発現をwhole mount in situ hybridization法により各発生段階において検出した。また、プラスチック切片の作製により発現部位を詳細に明らかにした。これらの遺伝子の進化系統樹を作成し、その保存性と機能ドメイン・発現部位について考察した。これらの変異体系統の表現型解析および標的遺伝子の発現解析の成果を、Spatiotemporal expression of the cocaine- and amphetamine-regulated transcript-like (cart-like) gene during zebrafish embryogenesis., Gene Expr Patterns.,2018およびDevelopmental expression of slurp-like1 and slurp-like2 during zebrafish early embryogenesis., Gene Expr Patterns.,2018として発表した。これらの標的遺伝子は未解析遺伝子であるため、発表論文が未解析の低分子量タンパク質の機能解析の進展の一助になることを願っている。

这项研究的最初目的是通过CRISPR/CAS9的基因座特异性敲来敲击目标基因座的报告基因，监测靶基因的表达，并产生纯合子并观察突变体的表型。但是，尽管记者基因在F0代中取得了成功，但不可能获得F1代。因此，从今年开始，进行了对在创建敲击线过程中获得的类似cart和sl的基因突变线的表型分析。将这些靶基因及其家族基因克隆，并在每个发育阶段都通过原位杂交检测到它们的表达。此外，通过准备塑料部分，详细阐明了表达位点。创建了这些基因的进化树，并检查了其保护特性，功能域和表达位点。对这些突变系的表型分析的结果和靶基因的表达分析的结果表示为可卡因和苯丙胺调节的转录样（手推车）基因的时空表达。模式。，2018年。由于这些靶基因是未分析的基因，我们希望发表的论文将有助于对未分析的低分子量蛋白进行功能分析。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Functional visualization and disruption of targeted genes using the CRISPR/Cas9-mediated eGFP reporter integration in zebrafish

使用 CRISPR/Cas9 介导的 eGFP 报告基因整合在斑马鱼中实现功能可视化和目标基因破坏

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kiyohito Taimatsu;Satoshi Ota;Kanoko Yanagi;Tomohiro Namiki;Rie Ohga;Shin-ichi Higashijima;Atsuo Kawahara
通讯作者：
Atsuo Kawahara

Functional visualization and disruption of target genes by CRISPR/Cas9-mediated eGFP reporter integration into zebrafish genome (poster)

通过 CRISPR/Cas9 介导的 eGFP 报告基因整合到斑马鱼基因组中对目标基因进行功能可视化和破坏（海报）