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ユビキチンリガーゼRNF183が関連する炎症性腸疾患の発症機構と治療薬の開発

泛素连接酶RNF183相关炎症性肠病的发病机制及治疗药物的开发

基本信息

批准号：
18H06105
负责人：
岡元拓海
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-08-24 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H06105/
关键词：
ユビキチンリガーゼ RNF183 炎症性腸疾患クローン病潰瘍性大腸炎

项目摘要

ユビキチンリガーゼRNF183は、申請者らがバイオインフォマティクス的手法により同定に成功した新規遺伝子を含む37種のユビキチンリガーゼの一つである。最近、炎症性腸疾患（IBD; inflammatory bowel disease）である潰瘍性大腸炎およびクローン病患者において、大腸でRNF183の発現が亢進していることが判明したことから、炎症性腸疾患とRNF183の関連性が示唆されている。本研究では、RNF183が関与するIBD発症機構を明らかにし、RNF183を標的としたIBD治療薬の開発のためのスクリーニング系の構築および薬物評価を目的としている。今年度は、3xFLAG-RNF183安定発現HEK293細胞を用いたショットガンプロテオーム解析によるRNF183結合タンパク質の同定を行い、同定したタンパク質におけるRNF183によるユビキチン化の役割について解析を行った。その結果、基質候補としてNa,K-ATPase α1サブユニットを同定し、共免疫沈降法によりRNF183と共沈降することも確認した。この時、Na,K-ATPase α1と複合体を形成しているNa,K-ATPase β1も共沈降した。次に、Na,K-ATPase α1およびβ1のユビキチン化の検証を行った。その結果、Na,K-ATPase β1においてRNF183存在下でのユビキチン化が認められた。さらに、mock細胞と3xFLAG-RNF183安定発現細胞を用いてNa,K-ATPase α1およびβ1の発現量を比較したところ、3xFLAG-RNF183安定発現細胞ではNa,K-ATPase α1およびβ1の両方の発現量がmock細胞に比べ、顕著に減少していた。以上の結果から、RNF183はNa,K-ATPase β1をユビキチン化することでNa,K-ATPase複合体を分解することが示唆された。

RNF183, the applicant's method of success, including 37 kinds of applications Recently, it has been found that the expression of RNF183 in the large intestine is increased in patients with ulcerative colitis and inflammatory bowel disease (IBD), and the relationship between inflammatory bowel disease and RNF183 has been demonstrated. This study aims to clarify the relationship between RNF183 and IBD development mechanisms, and to establish a framework for the development of IBD therapy based on RNF183. This year, 3xFLAG-RNF183 stably developed HEK293 cells for use in the analysis of RNF183 in combination with the identification of the quality of the product, the identification of the quality of the product, RNF183 for use in the analysis of the product. Results: Matrix candidate Na,K-ATPase α1 was identified by co-immunoprecipitation. Na, K-ATPase α1 complex was formed during the precipitation of Na,K-ATPase β1 complex. The activity of Na,K-ATPase α1 and β1 in the secondary enzyme was investigated. The results showed that Na,K-ATPase β1 could be transformed into RNF183 in the presence of Na,K-ATPase β1. Compared with 3xFLAG-RNF183 stable developing cells, the production of Na, K-ATPase α 1 and β 1 in 3xFLAG-RNF183 stable developing cells decreased. As a result, RNF183 showed that Na,K-ATPase β1 could be dissociated from Na,K-ATPase complex.