iPS細胞由来立体網膜組織を用いた常染色体優性視神経萎縮症の病態解明

使用 iPS 细胞来源的 3D 视网膜组织阐明常染色体显性视神经萎缩的病理学

• 批准号: 18H06259
• 负责人: 小林 航
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-08-24 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H06259/
• 关键词: ヒトiPS細胞; 立体網膜組織; 網膜神経節細胞; ミトコンドリア; 疾患特異的iPS細胞; 常染色体優性視神経萎縮症

平成30年度はヒトiPS細胞由来立体網膜組織から網膜神経節細胞を効率的に単離精製する方法として、Immunopanning法とMACS法での比較検討を行った。具体的には、Immunopanning法では抗マクロファージ抗体と抗Thy1抗体で単離するのに対して、MACS法ではより簡易的に単離すること目的として抗Thy1抗体のみで単離を行った。また、立体網膜組織の維持培養期間に関してもこれまでの100日前後から、50日から75日に短縮して比較検討を行った。その結果、MACS法では維持培養期間が短くても単離した網膜神経節細胞の方が有意に長い神経突起伸長を認め、網膜神経細胞の観察研究には適していることが示唆された。また、立体網膜組織及び網膜神経節細胞の神経突起におけるミトコンドリアの局在をCellLight Mitochondria-GFPを用いてイメージング及び免疫染色を施行した。今後はミトコンドリア障害や緑内障関連神経障害によるタイムラプスな観察を行い、軸索輸送の変化を確認する。また、立体網膜組織に神経障害を与えた際のミトコンドリア関連マーカーの推移をRT-qPCR法を用いて測定したところ、発現の減少が確認され、神経障害とミトコンドリアの関連が示唆された。本年度は、常染色体優性視神経症患者由来のiPS細胞が樹立出来次第、立体網膜組織への分化誘導を行い、網膜神経節細胞を単離して正常人との比較検討を行う予定である。

A comparative study was conducted on the purification of iPS cells from stereomental tissue to retinal ganglion cells in the 2000 s. The specific Immunopanning method is to isolate anti-Thy-1 antibody from anti-Thy-1 antibody. The MACS method is to isolate anti-Thy-1 antibody from anti-Thy-1 antibody. A comparative study was conducted on the maintenance culture period of stereoscopic retina tissues from 100 days to 50 days and 75 days to 75 days. The results showed that the MACS method was suitable for the study of retinal ganglion cells during the maintenance period. In addition, the three-dimensional retinal tissue and retinal ganglion cells were stained with CellLight Mitochondria and immunostaining. In the future, we will continue to investigate and confirm the changes in axial transmission due to cataract and cataract related neurological disorders. In addition, the relationship between brain damage and brain tissue development was confirmed by RT-qPCR. This year, we conducted a comparative study on the establishment of iPS cells derived from patients with autosomal dominant neurosis, the induction of differentiation of stereoscopic retinal tissue, and the isolation of retinal ganglion cells from normal subjects.

项目成果

ヒトiPS細胞由来立体網膜組織から単離した網膜神経節細胞の解析

对从人 iPS 细胞衍生的 3D 视网膜组织中分离的视网膜神经节细胞进行分析

• 发表时间: 2018
• 作者: Hirose K;Usami Y;Sato S;Sharyo M;Oya K;Komori T;Toyosawa S;小林 航
• 通讯作者: 小林 航

Purified NTG iPS-RGCs

纯化的 NTG iPS-RGC

• 发表时间: 2018
• 作者: 大野 雄太;佐藤 慶太郎;柏俣 正典;小林 航
• 通讯作者: 小林 航