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血管異常収縮の原因分子であるスフィンゴ脂質の産生経路の解明

阐明鞘脂的产生途径，鞘脂是导致血管异常收缩的分子

基本信息

批准号：
21890166
负责人：
高田雄一
金额：
$ 1.62万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890166/
关键词：
スフィンゴ脂質活性酸素マクロファージ血管異常収縮

项目摘要

本年度は、血管異常収縮の原因分子であるスフィンゴシルホスホリルコリン(SPC)が、活性酸素(その中でも特にOHラジカル)依存的にスフィンゴミエリンから産生されることを、分子レベルおよび細胞レベルで証明するため、それぞれ検討をおこない、以下の研究成果を得た。1) 分子レベル:酵素を含まない溶液中で、OHラジカルとSPCが実際に産生されることを直接証明するため、OHラジカルについては、スピントラップ剤(DMPO)を用いた電子スピン共鳴測定法により定量化し、また、SPC産生については、SPC安定同位体元素標識体(SPC-d3)を内部標準物質としたLC-MS/MS(MRMモード)測定法を用いて検討した。結果としては、鉄イオンと過酸化水素を含む酸性溶液中でOHラジカルが産生され、さらに、そのOHラジカル産生条件下において、SPCが著明に産生されることが判明した。2) 細胞レベル:本研究では、SPC産生メカニズムの基盤として、酸性環境かつ過酸化水素が豊富な、マクロファージのライソゾーム中における赤血球消化を想定している。そこで、ボルボールエステル(PMA)刺激により、ヒト単球系細胞株であるTHP-1をマクロファージ様細胞に分化させた後、赤血球を貧食させ、経時的にSPC産生量を測定した。現在、予備的実験段階ではあるが、赤血球添加12時間後以降において、確かにSPC産生量が増加していることが証明された。さらに、鉄イオンを含まない赤血球ゴーストを用いて同様の実験を行った場合には、SPC産生量は増加しないことが判明した。以上により、SPC産生経路として想定した仮説が、分子レベルでも細胞レベルでも、正しいことが証明された。

This year, the following research results were obtained in the molecular and cellular studies on the causes of abnormal vascular contraction: 1)Molecules: enzymes in solution, OH, SPC, SPC. As a result, OH radicals were produced in acidic solutions containing iron and peracidified water, and SPC was clearly produced under the conditions of OH radicals. 2)Cell cycle: In this study, SPC production was affected by the substrate, acidic environment, excessive acidity, high concentration of water, and poor digestion of red blood cells. The amount of SPC produced by THP-1 cells after differentiation and depletion of erythrocytes was measured. Now, the preparation of the stage is not correct, red blood cells added after 12 hours to reduce, indeed, SPC production increased. The amount of SPC produced in the process increased. The above mentioned SPC production process is based on the theory of molecular biology and molecular biology.