血管異常収縮の原因分子であるスフィンゴ脂質の産生経路の解明

阐明鞘脂的产生途径，鞘脂是导致血管异常收缩的分子

基本信息

批准号：
21890166
负责人：
高田雄一
金额：
$ 1.62万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890166/
关键词：
スフィンゴ脂質活性酸素マクロファージ血管異常収縮

项目摘要

本年度は、血管異常収縮の原因分子であるスフィンゴシルホスホリルコリン(SPC)が、活性酸素(その中でも特にOHラジカル)依存的にスフィンゴミエリンから産生されることを、分子レベルおよび細胞レベルで証明するため、それぞれ検討をおこない、以下の研究成果を得た。1) 分子レベル:酵素を含まない溶液中で、OHラジカルとSPCが実際に産生されることを直接証明するため、OHラジカルについては、スピントラップ剤(DMPO)を用いた電子スピン共鳴測定法により定量化し、また、SPC産生については、SPC安定同位体元素標識体(SPC-d3)を内部標準物質としたLC-MS/MS(MRMモード)測定法を用いて検討した。結果としては、鉄イオンと過酸化水素を含む酸性溶液中でOHラジカルが産生され、さらに、そのOHラジカル産生条件下において、SPCが著明に産生されることが判明した。2) 細胞レベル:本研究では、SPC産生メカニズムの基盤として、酸性環境かつ過酸化水素が豊富な、マクロファージのライソゾーム中における赤血球消化を想定している。そこで、ボルボールエステル(PMA)刺激により、ヒト単球系細胞株であるTHP-1をマクロファージ様細胞に分化させた後、赤血球を貧食させ、経時的にSPC産生量を測定した。現在、予備的実験段階ではあるが、赤血球添加12時間後以降において、確かにSPC産生量が増加していることが証明された。さらに、鉄イオンを含まない赤血球ゴーストを用いて同様の実験を行った場合には、SPC産生量は増加しないことが判明した。以上により、SPC産生経路として想定した仮説が、分子レベルでも細胞レベルでも、正しいことが証明された。

今年，我们进行了一项研究，以证明负责异常血管收缩的分子鞘磷脂胆碱（SPC）是由鞘磷脂的依赖性产生的（特别是OH自由基），并获得了以下研究结果。 1）分子水平：直接证明OH自由基和SPC实际上是在不包含酶的溶液中产生的，使用自旋陷阱剂（DMPO）通过电子自旋谐振测量（DMPO）来定量OH自由基，并且还使用LC-MS/MS（MRM模式）使用SPC-DABC STARDEPEPEPEPER（dMPO）进行了SPC的产生（DMPO）。结果，在含铁离子和过氧化氢的酸性溶液中产生OH自由基，发现在OH自由基生产条件下，SPC非常明显地产生。 2）细胞水平：这项研究假设巨噬细胞溶酶体中的红细胞消化，这些溶酶体是酸性和富含过氧化物的氢，是SPC产生机制的基础。因此，通过VOLBOL酯（PMA）将人类单核细胞系THP-1分化为巨噬细胞样细胞，然后刺激红细胞，并随着时间的推移测量SPC的产生。尽管目前处于初步实验阶段，但已证明在添加红细胞后12小时后，SPC的产量肯定有所增加。此外，发现当使用不包含铁离子的红细胞鬼进行类似的实验时，SPC产生的量不会增加。因此，已经证明，假设被认为是SPC生产途径，无论是在分子和细胞水平上都是正确的。