血漿中のcell-free RNAを用いた高感度融合遺伝子解析による新規がん診断

使用血浆中的游离 RNA 通过高度灵敏的融合基因分析进行新型癌症诊断

• 批准号: 21K20846
• 负责人: 長谷川 延彦
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K20846/
• 关键词: cell free RNA; 融合遺伝子; 肺がん; 骨軟部腫瘍; cell-free RNA; リキッドバイオプシー

本研究は、現在まで困難とされている「がん患者血液検体を用いての融合遺伝子同定」について腫瘍組織診断と同等、またはそれ以上の精度で同定を進めることで、肺がんや骨軟部腫瘍を含む全がん的な予後改善を目的としている。しかしながら、現状のDNAベースの解析では有効な治療標的、組織診断に用いられる融合遺伝子の同定率は十分ではない。この問題の解決に向けて、血漿中のcell-free RNA (cfRNA)を用いて融合遺伝子解析のプロトコール構築とがん、骨軟部腫瘍における臨床的有用性を検討する。昨年度に、cfRNAを用いた高感度の融合遺伝子解析プロトコールを構築するため、微量のRNAから効率の良いcDNA合成、オリジナルプライマーを使用したPCR増幅、シークエンス解析法を検証した。複数の融合遺伝子を含むRNA標準品を用い、コピー数を1000から１桁まで段階希釈したものを一連の解析プロトコール手法に基づいて評価した。その後、臨床サンプルである非小細胞肺がん患者の末梢血血漿を用いて、ALK, ROS1, RETが検出できるオリジナルプライマーを使用し、検証を行なった。RNA標準品に含まれる、ALK融合遺伝子を微量の1桁コピーまでシークエンスで確認した。また、治療前またはPD（progressive disease）の非小細胞肺がん患者のcfRNAからは、9症例中7症例で腫瘍組織とブレークポイントを同一とする融合遺伝子を同定した。そのうち化学療法により著名な画像的縮小を認めた症例においては、化学療法後には融合遺伝子を同定しなかった。cfRNAを用いた融合遺伝子解析プロトコールを構築し、非小細胞肺がんに対して低侵襲での診断、治療効果モニタリングの可能性を見出した。本年度は、構築したプロトコールに基づいて、骨軟部腫瘍症例であるユーイング肉腫の治療前の末梢血血漿を用いて、腫瘍組織とブレークポイントを同一とするEWSR1-FLI1融合遺伝子を同定し、ユーイング肉腫に対して低侵襲での診断の可能性を見出した。

In this study, the results of this study show that the blood samples of the patients are the same as those of the patients in this study. in this study, the results of this study show that the blood samples of the patients are the same as those of the patients in this study, the blood samples of the patients are determined to be the same, and the accuracy of the tissue is the same as that of the patients in this study. the purpose of this study is to improve the overall accuracy of the lung and bone tissue. In the analysis of the diagnosis and treatment of the disease, the tissue breakage was used to fuse the child of the DNA, and the same rate was very high. In order to solve the problem, the cell-free RNA (cfRNA) in blood is used to analyze the usefulness of the machine. Last year, cfRNA used the high sensitivity fusion method to analyze the data, the trace amount of RNA, the rate of high sensitivity, the synthesis of cDNA, the use of PCR, and the method of analysis. The complex number "fusion" contains "RNA standard product usage", "number" 1000 "1 truss" section, "hope", "link", "parsing", "manipulation", "base", "data usage", and so on. After the treatment, the peripheral blood of the patients with non-small lung disease was treated with ALK, ROS1, RET and so on. The RNA standard product contains a small amount of information, and the ALK fusion product contains a small amount of information. The patients with non-small cytopathic lung disease (cfRNA) were diagnosed by PD (progressive disease) before treatment. In 7 of the 9 cases, the tissue samples of 7 of the 9 cases were similar to those of the same group. In the case of the famous portrait, there are some examples of the symptoms of the famous portrait, and the fusion is the same after the chemical method. CfRNA uses the fusion sub-unit to analyze the possibility that the lung is not small, that the lung is low invasive, that the treatment is effective, and that the possibility is not clear. This year, we have reported that there is a significant increase in the number of cases of disease in the department of bone and bone, and that the use of peripheral blood before the treatment of the disease, the use of peripheral blood before the treatment of the disease, the use of peripheral blood before the treatment of the disease, the detection of the same level of EWSR1-FLI1 fusion, and the possibility of low invasion.

项目成果

Highly sensitive fusion detection using plasma cell-free RNA in non-small-cell lung cancers.

• DOI: 10.1111/cas.15084
• 发表时间: 2021-10
• 期刊: Cancer science
• 影响因子: 5.7
• 作者: Hasegawa N;Kohsaka S;Kurokawa K;Shinno Y;Takeda Nakamura I;Ueno T;Kojima S;Kawazu M;Suehara Y;Ishijima M;Goto Y;Kojima Y;Yonemori K;Hayashi T;Saito T;Shukuya T;Takahashi F;Takahashi K;Mano H
• 通讯作者: Mano H

ユーイング肉腫における診断・治療モニタリングツールとしての血漿中の cell-free RNA の可能性

血浆游离 RNA 作为尤文氏肉瘤诊断和治疗监测工具的潜力

• 发表时间: 2022
• 作者: 長谷川 延彦;窪田 大介;高木 辰哉;齋藤 剛;岩田 慎太郎;川井 章;高阪 真路;間野 博行
• 通讯作者: 間野 博行

血漿セルフリーRNAを用いた融合遺伝子診断

使用血浆游离RNA进行融合基因诊断

• 发表时间: 2022
• 作者: 長谷川 延彦;窪田 大介;高木 辰哉;齋藤 剛;岩田 慎太郎;川井 章;高阪 真路;間野 博行;長谷川延彦
• 通讯作者: 長谷川延彦

Ewing肉腫における血漿中のcell-free RNAを用いた高感度融合遺伝子解析

使用尤文肉瘤中的浆细胞游离 RNA 进行高灵敏度融合基因分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 長谷川 延彦;高阪 真路;岩田 慎太郎;川井 章;齋藤 剛;佐々 恵太;窪田 大介;末原 義之;高木 辰哉;間野 博行;石島 旨章
• 通讯作者: 石島 旨章