高齢者白血病に対するBCL2阻害剤、メチル化阻害剤治療の治療予測マーカーの探索

抗アポトーシス因子であるBCL2阻害剤ベネトクラクス（VEN）とDNAメチル基転移酵素阻害剤デシタビン（DEC）との併用療法は高齢者急性骨髄性白血病において有望な治療効果を示した。しかし、一部の患者では効果が限定的であり同治療に対する治療抵抗性を認めている。そのため、治療反応性を予測し、適した患者に適した治療を選別することが課題であるが、患者選択や治療効果を裏付ける分子的基盤は不明な点が多い。本研究では、VEN/DEC治療前後の白血病細胞の遺伝子発現プロフェイリングを実施し、治療効果予測マーカーを特定することを目的とする。治療奏効/非奏効グループのRNA発現パターンの比較解析(bulk RNA sequencing)より、非奏効グループにおいてエネルギー代謝関連遺伝子の亢進や免疫応答関連遺伝子群の抑制が有意にみられることを見いだした。そこで、該当年度は奏効/非奏効グループで有意な発現差を認めた遺伝子群に対し、in vitroでの検証を行った。白血病細胞である4種のcell line、MV4;11、HL60、OCI-AML3、THP-1に対し、VEN/DEC単独もしくは併用で処理し、RT-qPCRにて各候補遺伝子のRNA発現変化およびbisulfite pyrosequencingにてDNAメチル化評価を行った。また、候補遺伝子に対し、レンチウイルスベクターによる遺伝子高発現細胞株を作製し、VEN/DECの感受性を検証した。その結果、脂肪酸代謝に関与するPPARγがDECにより脱メチル化され、発現が亢進することを確認した。また、PPARγの高発現細胞では、細胞増殖スピードは抑制されるもののVEN/DECに対する薬剤感受性は低下していた。これらの結果からPPARγの発現亢進が脂肪代謝を亢進させ、VEN/DECへの抵抗性に関与している可能性が示唆された。

抗アポトーシス因子であるBCL2阻害剤ベネトクラクス（VEN）とDNAメチル基転移酵素阻害剤デシタビン（DEC）との併用療法は高齢者急性骨髄性白血病において有望な治療効果を示した。しかし、一部の患者では効果が限定的であり同治療に対する治療抵抗性を認めている。そのため、治療反応性を予測し、適した患者に適した治療を選別することが課題であるが、患者選択や治療効果を裏付ける分子的基盤は不明な点が多い。本研究では、VEN/DEC治療前後の白血病細胞の遺伝子発現プロフェイリングを実施し、治療効果予測マーカーを特定することを目的とする。治療奏効/非奏効グループのRNA発現パターンの比較解析(bulk RNA sequencing)より、非奏効グループにおいてエネルギー代謝関連遺伝子の亢進や免疫応答関連遺伝子群の抑制が有意にみられることを見いだした。そこで、該当年度は奏効/非奏効グループで有意な発現差を認めた遺伝子群に対し、in vitroでの検証を行った。白血病細胞である4種のcell line、MV4;11、HL60、OCI-AML3、THP-1に対し、VEN/DEC単独もしくは併用で処理し、RT-qPCRにて各候補遺伝子のRNA発現変化およびbisulfite pyrosequencingにてDNAメチル化評価を行った。また、候補遺伝子に対し、レンチウイルスベクターによる遺伝子高発現細胞株を作製し、VEN/DECの感受性を検証した。その結果、脂肪酸代謝に関与するPPARγがDECにより脱メチル化され、発現が亢進することを確認した。また、PPARγの高発現細胞では、細胞増殖スピードは抑制されるもののVEN/DECに対する薬剤感受性は低下していた。これらの結果からPPARγの発現亢進が脂肪代謝を亢進させ、VEN/DECへの抵抗性に関与している可能性が示唆された。