トロンボモジュリンの絨毛細胞機能修飾に着目した胎盤機能不全への新規治療薬開発

开发一种新的胎盘功能不全治疗药物，重点是通过血栓调节蛋白改变绒毛细胞功能

• 批准号: 21K20962
• 负责人: 小田 紘子
• 金额: $ 2万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K20962/
• 关键词: 胎盤; トロンボモジュリン; 妊娠高血圧腎症; Drug delivery system; 胎盤機能不全

妊娠合併症新規治療戦略として、我々はDrug Delivery System技術を応用した胎盤標的型キャリアを開発し、PEG付加によるPEG化rTM製剤（rTMPEG）を作成した。PEG鎖にリコンビナントトロンボモジュリン （rTM）分子を結合させ分子量を大きくすることで、胎盤限局性に集積する胎盤標的型rTMを創薬した。さらにPEGに結合させたrTMの分子間距離を調整することで、薬剤の胎盤絨毛間腔表面への接着率が上がることを見出し、胎盤局所の薬理作用を向上させることに成功している。これらの発見の検証として蛍光標識したrTMPEGをヒト絨毛がん細胞株（BeWo細胞）に添加し、共焦点レーザー顕微鏡にて薬剤の細胞表面への接着率の比較実験を行い、rTMPEGがrTM単体と比べて細胞表面接着率が高いことを確認した。さらに蛍光標識したrTMPEG及びrTM を妊娠マウスに静脈投与し、１２、２４、４８時間後に臓器（胎児、胎盤、肝臓、腎臓、脾臓）を摘出し体内薬剤分布を比較した。In Vivo Imaging System(IVIS)により各臓器への薬剤集積量を計測した結果、 rTMPEGが胎盤に限局集積し胎児や他臓器には集積しないこと、 rTM単体と比較してrTMPEGが長時間胎盤内に留まることを示した。摘出した胎盤組織を共焦点顕微鏡にて観察し、絨毛管腔にrTMPEGが集積することを確認している。さらにこのrTMPEG製剤を正常妊娠マウスに投与し妊娠経過を観察したところ、rTMPEGは胎仔や胎盤の重量を増加させ、胎盤組織の血管新生を促し、胎盤機能の改善作用を示すことを明らかにした。今後は妊娠高血圧腎症のモデルマウスに実際に薬物投与を行い、治療効果を検証していく予定である。

作为妊娠并发症的一种新型治疗策略，我们使用药物输送系统技术开发了胎盘靶向载体，并使用PEG添加创建了Pegyper的RTM配方（RTMPEG）。通过结合重组血栓形成蛋白（RTM）分子与PEG链增加分子量，我们发现了一种胎盘靶向的RTM，该RTM积累在胎盘焦点状态下。此外，通过调节与PEG结合的RTM的分子间距离，已经发现，该药物对间质胎盘空间表面的粘附率增加了，并成功地改善了胎盘的药理作用。为了验证这些发现，将荧光标记的RTMPEG添加到人类绒毛膜癌细胞系（BEWO细胞）中，并使用共共聚焦激光显微镜进行了比较实验，以比较该药物的粘附速率与细胞表面相比，确认RTMPEG比RTMPEG具有更高的细胞表面粘附速率。此外，静脉注射荧光标记为RTMPEG和RTM，并在48小时后去除12、24和48小时的器官（胎儿，胎盘，肝脏，肾脏，肾脏，脾脏），并比较Vivo中药物的分布。使用体内成像系统（IVI）测量了每个器官中的药物积累量，并显示RTMPEG在胎盘中局部积累，而不是在胎儿或其他器官中，并且与单独使用RTM相比，RTMPEG长时间在胎盘中长期存在。在共聚焦显微镜下观察到去除的胎盘组织，以确认RTMPEG在绒毛管腔中的积累。此外，当将这种RTMPEG制剂用于正常的怀孕小鼠并观察到妊娠进展时，发现RTMPEG会增加胎儿和胎盘的体重，促进胎盘组织的新生血管化，并且具有改善胎盘功能的作用。将来，我们计划实际使用先兆子痫的模型小鼠给予药物，并验证治疗的有效性。

项目成果

PEG-conjugated recombinant Thrombomodulin; a Novel Placenta Targeting Nanomedicine Ameliorates Preeclampsia in Mice. -A Challenge for Clinical Application of Organ Targeting Drug Delivery Nanotechnology Aimed to Treat Placental Dysfunction

PEG缀合的重组血栓调节蛋白；

• 发表时间: 2022
• 作者: 熊谷 祐子;宮戸 秀世;大澤 英之;山口 博紀;川平 洋;堀江 久永;細谷 好則;味村 俊樹;北山 丈二，佐田 尚宏;Oda.H.,T.Nagamatsu,Y.Osuga.;Hiroko Oda
• 通讯作者: Hiroko Oda