application of postmortem cultured fibroblast to estimation of Blood ethanol concentration

死后培养成纤维细胞在血液乙醇浓度估算中的应用

• 批准号: 21K21178
• 负责人: 榎本 祐子
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K21178/
• 关键词: 死後培養線維芽細胞; ADH酵素活性; 血中エタノール濃度; エタノール濃度; 代謝酵素多型; ADH; ALDH

エタノールは、法医学分野において重要な薬毒物の1つであるが、血中エタノール濃度推定の際には、エタノール代謝酵素の遺伝的多型による酵素活性の個体差は考慮されていない。皮膚の培養線維芽細胞は生細胞であるため死後変化の影響がなく、生前の先天的性質を維持したまま取り出すことが可能である。本研究では死後培養線維芽細胞を用いて個体差を反映させることを目的とする。2022年度は昨年度に引き続き、動物実験での解析に加え、ヒトの解剖症例を用いた検討も進めた。ラット肝臓におけるADHの酵素活性は、死後経過時間とともに低下し、24時間後には著しく減少していた。ラットとヒトの皮膚組織を採取し線維芽細胞を培養後、RNAを抽出し、ラットはGAPDH及びADH1、ヒトはGAPDH及びADH1BプローブにてReal-time quantitative RT-PCRを実施した。またヒトADH1Bのrs1229984の遺伝子多型分類も行った。ADH1Bの遺伝子多型と発現量には相関は認められなかった。ヒトでは線維芽細胞においてはADH1B遺伝子の発現が一定量認められ、死後変化の影響を受けやすい肝組織の代替として、死後の酵素活性測定に使用できる可能性が示唆された。しかしながら、解剖症例15例のみの解析であり、ADH1B遺伝子の多型分類では ADH1B*1/*2が8例、ADH1B*2/*2が7例あったが、ADH1B*1/*1はいなかった。さらに症例数を増やして解析を行いたいと考える。ADH酵素活性の測定方法については、昨年度に引き続き市販キット及びガスクロマトグラフを用いて測定を行っているが、いまだ至適な条件確立に至っていない。引き続き、検討を続ける予定である。

エ タ ノ ー ル は, forensic eset に お い て important な 薬 poison の 1 つ で あ る が, blood エ タ ノ ー ル concentration presumption の interstate に は, エ タ ノ ー ル polymorphism of metabolic enzyme の but 伝 に よ る enzyme activity の individual difference は consider さ れ て い な い. Skin の produce line d bud cells born は で あ る た め - after the death of the spheroidized の が な く の innate nature, while was living を maintain し た ま ま take り out す こ と が may で あ る. In this study, で で postmortem culture of endothelial cells を was conducted to reflect the させる とを とを とを objective とする by using the を individual variation を. 2022 annual に は yesterday quoted き 続 き, animal be 験 で の parsing に え, ヒ ト の autopsy cases を with い た beg も 検 into め た. Crucial ラ ッ ト liver に お け る ADH は の enzyme activity, after the death of 経 time と と も に し, after 24 time に は the し く reduce し て い た. ラ ッ ト と ヒ ト の skin tissue を after taking し line d を bud cells develop, taking し, RNA を ラ ッ ト は GAPDH and び ADH1, ヒ ト は GAPDH and び ADH1B プ ロ ー ブ に て Real - time policy rt-pcr を be applied し た. Youdaoplaceholder0 ADH1B <s:1> rs1229984 cultural heritage 伝 subtype classification またヒト row った. The ADH1B heritage site has 伝 subtypes, と occurrence quantity, に 伝 related <s:1> recognition, められな った った. ヒ ト で は line d bud cells に お い て は ADH1B posthumous son 伝 の 発 が now amount to recognize め ら れ, died - の を by け や す い の instead of the liver tissue と し て の after death and enzyme activity determination に use で き が る possibility in stopping さ れ た. し か し な が ら 15 cases, anatomical の み の parsing で あ り, ADH1B but 伝 の type classification more で は ADH1B * 1 / * 2 が 8 cases, 2 が ADH1B * 2 / *, 7 cases あ っ た が, ADH1B * 1 / * 1 は い な か っ た. The number of cases of さらに syndrome を increases や て て analysis を line た た と examination える. の ADH enzyme activity determination method に つ い て は, yesterday's annual に き 続 き city vendor キ ッ ト and び ガ ス ク ロ マ ト グ ラ フ を with い て measurement line を っ て い る が, い ま だ to optimal な conditions established に to っ て い な い. Cite 続 続 続 and 検 to discuss を続ける and set である.

项目成果

死後肝組織のアルコール脱水素酵素 (ADH)活性変化及び培養線維芽細胞におけるADH発現

死后肝组织中乙醇脱氢酶（ADH）活性和培养成纤维细胞中ADH表达的变化

• 发表时间: 2023
• 作者: 榎本祐子;松本智寛;橋谷田真樹;眞鍋 翔;大林将弘;赤根 敦
• 通讯作者: 赤根 敦