mRNP精製システムを用いたmiRNA作用機序の解析

利用mRNP纯化系统分析miRNA作用机制

• 批准号: 22870027
• 负责人: 泉 奈津子
• 金额: $ 1.69万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22870027/
• 关键词: miRNA; mRNP; 翻訳抑制

miRNA(micro RNA)は、標的mRNAの3'非翻訳領域(UTR)に結合することにより、その発現を抑制する。本研究は、miRNA結合によるmRNP(mRNA-タンパク質複合体)の変化に着目した解析から、特に翻訳抑制におけるmiRNAの作用実態を明らかにすることを目的としている。本年度は細胞内からmRNPを精製する手法の確立を目指した。mRNPを精製するため、特定のRNA2次構造と結合することが知られている3種のタンパク質(λN、PP7CP、L7Ae)を用いて培養細胞に発現させたレポーターmRNPの精製を試みたところ、λN、PP7CPの非特異的結合が少なく、mRNP精製に有効であることがわかった。しかしいずれを用いた場合にもレポーターmRNPの回収効率が非常に低い上に、回収したmRNPが精製用の磁気ビーズから効率よく溶出されないという問題があることが判明した。そのため当初計画していた解析を進めるには大幅なスケールアップが必要であり、現在実験系の見直しとmRNP精製の条件を再検討している。

miRNA(micro RNA) binds to the 3'untranslated region (UTR) of the target mRNA and inhibits its expression. This study aims to clarify the status of miRNA binding and mRNP(mRNA-protein complex) transformation in the context of miRNA binding, and to clarify the role of miRNA in the context of miRNA inhibition. This year, the method of refining mRNP in cells has been established. The purification of mRNP was carried out by culturing cells with three kinds of RNA molecules (λN, PP7CP, L7Ae), and the purification of mRNP was carried out by non-specific binding of λN, PP7CP. The recovery rate of mRNP is very low. The recovery rate of mRNP is very low. The original plan was analyzed and the conditions for refining the mRNP were discussed again.

项目成果

The nonsense-mediated mRNA decay SMG-1 kinase is regulated by large-scale conformational changes controlled by SMG-8

• DOI: 10.1101/gad.606911
• 发表时间: 2011-01-15
• 期刊: GENES & DEVELOPMENT
• 影响因子: 10.5
• 作者: Arias-Palomo, Ernesto;Yamashita, Akio;Llorca, Oscar
• 通讯作者: Llorca, Oscar