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脂質酸化酵素のクロストークにより産生される新規生理活性脂質の探索

寻找由脂质氧化酶串扰产生的新型生物活性脂质

基本信息

批准号：
22K20570
负责人：
中島史恵
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

標品5-OH-thromboxane B2の作製を行った。作製には一重項酸素付加反応を用い、thromboxane B2と光増感剤であるメチレンブルーを4℃にて一晩反応させた。サンプルをHPLCにより分析・精製した後、質量分析装置による解析を行った結果、 thromboxane B2の5位の炭素にOH基を有する5-OH-thromboxane B2の生成が確認された。さらに、精製した標品5-OH-thromboxane B2を用いて、質量分析装置による検出の最適化を行い、5-OH-thromboxane B2の定量方法を確立した。5-OH-thromboxane B2を検出するin vitroの系の確立を行った。5-OH-thromboxane B2の産生に必要な酵素である5-リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼ-2、トロンボキサン合成酵素の3つの酵素の発現が期待されるヒト血液由来細胞であるHL-60を用いて検討を行った。DMSOを4日間処理し、成熟顆粒球へと分化させたのち、LPS刺激によりシクロオキシゲナーゼ-2の発現を誘導した結果、シクロオキシゲナーゼ-2により産生されるprostaglandin E2/D2、トロンボキサン合成酵素によって産生されるthromboxane B2の生成が確認された。また、カルシウムイオノフォア刺激により、5-リポキシゲナーゼにより産生されるleukotriene B4の生成が確認された。これらのことから、成熟顆粒球へと分化させたHL-60に適切な刺激を行うことで、5-OH-thromboxane B2の産生に必要な酵素である5-リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼ-2、トロンボキサン合成酵素の三つの酵素を発現することが明らかとなり、成熟顆粒球へと分化させたHL-60がin vitroモデルとして使用可能であることを確認した。

Standard 5-OH-thromboxane B2 was prepared. For the first time in a long time, the temperature of the reaction is higher than the temperature of the reaction. After HPLC analysis and purification, the analysis results of mass analysis device and the formation of 5-OH-thrombin B2 in carbon OH group at position 5 of thrombin B2 were confirmed. In addition, the standard 5-OH-thrombin B2 was purified and optimized by mass spectrometry. The quantitative method of 5-OH-thrombin B2 was established. 5-OH-thromboxane B2 was found in vitro and was used as a catalyst. 5-OH-thromboxane B2 production of essential enzymes, such as 5-nitrogen-containing enzymes, 5-nitrogen-containing enzymes, 5- DMSO treatment for 4 days, differentiation of mature granulocytes, LPS stimulation, induction of prostaglandin E2/D2, production of prostaglandin B2, production of prostaglandin synthase, and identification of prostaglandin B2 production. The production of leukotriene B4 is confirmed by the production of leukotriene B4. HL-60 in vitro differentiation of mature granulocytes is stimulated appropriately and enzymes necessary for 5-OH-thrombin B2 production are identified.