NUP98-NSD1白血病の発症・病態機序の解明

阐明NUP98-NSD1白血病的发病和病理机制

• 批准号: 22K20842
• 负责人: 松川 敏大
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20842/
• 关键词: NUP98-NSD1; 急性骨髄性白血病; FLT3-ITD; NUP98::NSD1

本研究では、北海道白血病ネットで集めた検体の中から、PCR法にてNUP98-NSD1陽性の成人急性骨髄性白血病検体を見つけ、NUP98-NSD1のクローニングを行った。当初、NUP98-NSD1の全長をクローニングすることを計画していたが、NUP98-NSD1は5700bp程度と非常に大きいため、全体を一辺にクローニングを行うことは困難で合った。そこで、全長の前半部分と後半部分に分けてクローニングを行い、まず前半部分をPCRで増幅した後、ベクターを制限酵素で切断し切断部分にNUP98-NSD1の前半部分を挿入し、形質転換後にプラスミド抽出を行った。後半部分に対しても同様の手法を用いて後半部分をPCRで増幅し、ベクターを制限酵素で切断し切断部分にNUP98-NSD1の後半部を挿入し、形質転換後にプラスミド抽出を行った。その後、シークエンスで前半、後半のシークエンスを行った。シークエンスで確認すると一部に塩基置換が認められたためPCR法などにより修復を行ない、オリジナルのシークエンスが復元できた。修正した前半と後半部分を結合し、全長を確認する再度シークエンスで確認した。出来上がったNUP98-NSD1をヒトB細胞系細胞株であるBaF3に遺伝子導入し、ピューロマイシンによる薬剤セレクションでNUP98-NSD1陽性細胞株を樹立した。今後、FLT3-ITDの遺伝子導入を行い、出来上がった細胞株に対してNUP98-NSD1/FLT3-ITDを有する細胞株とNUP98-NSD1のみを有する細胞株に対して抗がん剤投与による薬剤耐性の検討を行う予定である。

This study で は, Hokkaido leukemia ネ ッ ト で set め た 検 body in の か ら, PCR method に て NUP98 - NSD1 positive の adult acute leukaemia of sex of bone marrow 検 body を see つ け, NUP98 NSD1 の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. Length at the beginning, the NUP98 - NSD1 の を ク ロ ー ニ ン グ す る こ と を project し て い た が, NUP98 NSD1 は 5700 bp levels と very に き い た め, all を 辺 に ク ロ ー ニ ン グ を line う こ と は difficult で close っ た. そ こ で, span の first half part after と に points け て ク ロ ー ニ ン グ を い, ま ず first half を PCR で raised し picture, after た ベ ク タ ー で limitations を enzyme cut し cut part に NUP98 - NSD1 の first half を scions into し, form quality planning change after に プ ラ ス ミ ド spare line を っ た. With others in second half に し seaborne て も の gimmick を with い て after half を PCR で raised し, ベ ク タ ー で limitations を enzyme cut し cut off part に NUP98 - NSD1 の second half を scions into し, form quality planning change after に プ ラ ス ミ ド spare line を っ た. Youdaoplaceholder0 after そ, シ そ エ エ エ エ エ スで the first half and the second half of <s:1> シ エ エ エ エ スを スを スを スを スを スを スを スを スを スを スを スを った シ ー ク エ ン ス で confirm す る と a に salt base displacement が recognize め ら れ た た め PCR method な ど に よ り line repair を な い, オ リ ジ ナ ル の シ ー ク エ ン ス が recovery で き た. Second part in the first half of the fixed し た と を し, span を confirm す る again シ ー ク エ ン ス で confirm し た. Out on が っ た NUP98 - NSD1 を ヒ ト B cell line cell lines で あ る BaF3 に heritage 伝 import し, ピ ュ ー ロ マ イ シ ン に よ る 薬 tonic セ レ ク シ ョ ン で NUP98 - NSD1 positive cell lines を set し た. In the future, FLT3 ITD の heritage 伝 import line を い, out on が っ た cell lines に し seaborne て NUP98 - NSD1 FLT3 / ITD - を have す る cell lines と NUP98 - NSD1 の み を have す る cell lines に し seaborne て resistance が ん tonic cast with に よ る 薬 tonic patience の 検 line for を う designated で あ る.