NUP98-NSD1白血病の発症・病態機序の解明

阐明NUP98-NSD1白血病的发病和病理机制

• 批准号: 22K20842
• 负责人: 松川 敏大
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20842/
• 关键词: NUP98-NSD1; 急性骨髄性白血病; FLT3-ITD; NUP98::NSD1

本研究では、北海道白血病ネットで集めた検体の中から、PCR法にてNUP98-NSD1陽性の成人急性骨髄性白血病検体を見つけ、NUP98-NSD1のクローニングを行った。当初、NUP98-NSD1の全長をクローニングすることを計画していたが、NUP98-NSD1は5700bp程度と非常に大きいため、全体を一辺にクローニングを行うことは困難で合った。そこで、全長の前半部分と後半部分に分けてクローニングを行い、まず前半部分をPCRで増幅した後、ベクターを制限酵素で切断し切断部分にNUP98-NSD1の前半部分を挿入し、形質転換後にプラスミド抽出を行った。後半部分に対しても同様の手法を用いて後半部分をPCRで増幅し、ベクターを制限酵素で切断し切断部分にNUP98-NSD1の後半部を挿入し、形質転換後にプラスミド抽出を行った。その後、シークエンスで前半、後半のシークエンスを行った。シークエンスで確認すると一部に塩基置換が認められたためPCR法などにより修復を行ない、オリジナルのシークエンスが復元できた。修正した前半と後半部分を結合し、全長を確認する再度シークエンスで確認した。出来上がったNUP98-NSD1をヒトB細胞系細胞株であるBaF3に遺伝子導入し、ピューロマイシンによる薬剤セレクションでNUP98-NSD1陽性細胞株を樹立した。今後、FLT3-ITDの遺伝子導入を行い、出来上がった細胞株に対してNUP98-NSD1/FLT3-ITDを有する細胞株とNUP98-NSD1のみを有する細胞株に対して抗がん剤投与による薬剤耐性の検討を行う予定である。

在这项研究中，使用来自北海道白血病网上收集的标本的PCR方法发现NUP98-NSD1阳性成年急性髓样白血病标本，并克隆了NUP98-NSD1。最初，我们计划克隆NUP98-NSD1的整个长度，但是由于NUP98-NSD1在5700 bp左右非常大，因此很难将整个东西克隆到一侧。因此，克隆进行分为上半场和全长的后半部分进行，并且零件的前半部分通过PCR放大，然后用限制性酶切割矢量，然后将NUP98-NSD1的前半部分插入，然后将其插入裂解部分，并在转换后进行了静脉萃取。下半部分通过PCR使用相同的方法扩增，并用限制酶裂解矢量，并将NUP98-NSD1的下半部分插入裂解部分，并在转化后执行质粒提取。然后他们执行了下半场和下半场序列。当通过测序确认时，发现了一些基本取代，因此使用PCR方法等进行了维修，并恢复了原始序列。修订后的上半场和下半场合并，下半场再次通过测序检查全长，再次确认了下半场。将所得的NUP98-NSD1转染到人B细胞系BAF3中，NUP98-NSD1阳性细胞系是通过使用紫霉素的药物选择来确定的。将来，我们计划将FLT3-ITD基因转移到所得的细胞系中，并通过对含有NUP98-NSD1/FLT3-ITD的细胞系和仅包含NUP98-NSD1的细胞系进行抗癌剂来调查耐药性。