サイトカイン刺激したMSC由来細胞外小胞の肩腱板断裂に対する骨腱部修復効果の解明

間葉系間質細胞(mesenchymal stroma cell, MSC)は，エクソソームを主体とする細胞外小胞(small extracellular vesicles, sEVs)を分泌し，細胞間の情報伝達を行うことで，組織修復に寄与することが知られており，腱板断裂などの運動器組織に対する再生医療としても注目を集めている．本分野において，MSCの培養条件の違いによって分泌された異なるsEVsの評価はなされていない．研究代表者は，肩腱板断裂モデルラットを用いて，IFN-γでプレコンディショニングされたMSCが分泌するsEVsが骨ー腱修復に与える影響を検討する上で，本年度に以下の成果を得た．刺激薬剤をIFN-γに選定し，刺激濃度を振り分け，各条件におけるMSCの生存率やMSC特性を評価した．MSCの起源としては脂肪組織由来を用いた．細胞生存率はいずれの条件でも95%以上を維持することができ，一般的なMSC陽性/陰性マーカーは刺激にかかわらず変動を認めなかった．一方で，PDL-1やHLA-DRなどのタンパク質は，刺激濃度とともに発現陽性細胞率が増加した．細胞から分泌されるCD9またはCD63陽性sEVs定量評価を行ったが，CD9陽性sEVsは刺激により減少したが，CD63陽性sEVsは低濃度刺激では減少するものの，濃度依存的に増加する結果となった．また，IFN-γ刺激によりsEVs中のIDO1タンパク質発現が上昇することも判明した．

間葉系間質細胞(mesenchymal stroma cell, MSC)は，エクソソームを主体とする細胞外小胞(small extracellular vesicles, sEVs)を分泌し，細胞間の情報伝達を行うことで，組織修復に寄与することが知られており，腱板断裂などの運動器組織に対する再生医療としても注目を集めている．本分野において，MSCの培養条件の違いによって分泌された異なるsEVsの評価はなされていない．研究代表者は，肩腱板断裂モデルラットを用いて，IFN-γでプレコンディショニングされたMSCが分泌するsEVsが骨ー腱修復に与える影響を検討する上で，本年度に以下の成果を得た．刺激薬剤をIFN-γに選定し，刺激濃度を振り分け，各条件におけるMSCの生存率やMSC特性を評価した．MSCの起源としては脂肪組織由来を用いた．細胞生存率はいずれの条件でも95%以上を維持することができ，一般的なMSC陽性/陰性マーカーは刺激にかかわらず変動を認めなかった．一方で，PDL-1やHLA-DRなどのタンパク質は，刺激濃度とともに発現陽性細胞率が増加した．細胞から分泌されるCD9またはCD63陽性sEVs定量評価を行ったが，CD9陽性sEVsは刺激により減少したが，CD63陽性sEVsは低濃度刺激では減少するものの，濃度依存的に増加する結果となった．また，IFN-γ刺激によりsEVs中のIDO1タンパク質発現が上昇することも判明した．