間葉系間質細胞の臓器特異性を決定する転写因子の解析

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【骨格筋特異的な転写因子X陽性細胞の様々な臓器における発現解析】　マウスの骨格筋、心臓、皮下脂肪、肝臓、肺、および小腸の6臓器を対象に、転写因子X陽性細胞の分布を確認した。具体的には各臓器の凍結サンプルに対する転写因子Xと各種細胞マーカーの蛍光免疫染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡を用いて転写因子X陽性細胞の局在を観察した。【発生過程における骨格筋特異的な転写因子X陽性細胞の同定と機能解析】　筋における転写因子Xの機能解析を目的として、CRISPR-Cas9 systemを用いた転写因子X遺伝子組み替えマウス(転写因子X floxマウス) の作出を実施した。筋形成期における転写因子X陽性細胞の同定を目的として、特に間葉系間質細胞に関しては、PDGFRα陽性細胞（以下Pα細胞）の核がGFP標識されたマウス (Pdgfra-H2BeGFPマウス) のマウス胎児の前肢を行った。具体的には、筋形成時期であるE11.5, E12.5のマウス胎児の薄切標本を作製、あるいは、透明化した胎児サンプルに対する蛍光免疫染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。【間葉系間質細胞の臓器特異性を決定する転写因子の解析】　将来的に、筋間質の臓器特異性に関する解析結果を他臓器へも応用する目的で、マウス6臓器（骨格筋、心臓、皮下脂肪、肝臓、肺、小腸）のPα細胞に対するRNAseq解析結果に関して、再度多臓器間比較を実施した。結果、筋Pα細胞にて特異的に高発現する転写因子X以外にも、小腸筋層や小腸粘膜層といったPα細胞に固有な遺伝子群を見出した。