EGFRの脂質ラフト抑留機構を標的とした新たな頭頚部癌治療戦略の開発

针对EGFR脂筏保留机制开发新的头颈癌治疗策略

基本信息

批准号：
22K20997
负责人：
劉隣
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20997/
关键词：
EGFR CYLD セツキシマブ脂質ラフトエンドサイトーシス

项目摘要

本研究は、腫瘍抑制遺伝子であるCYLD を基軸としてEGFRの動態制御機構を解明し、有効な EGFR標的治療戦略を開発することを目的とする。CYLDの発現を抑制すると、EGFRが脂質ラフトに拘束されることでエンドサイトーシスが阻害され、CTX耐性を示すことが判った。さらにコレステロール除去によって脂質ラフトを崩壊させると、エンドサイトーシスの回復によりCTX耐性が克服された。そのため、CTXとコレステロール降下薬との併用は治療効果の改善に有用であると考えられる。しかし、CYLDがどのように脂質ラフトにおけるEGFRの動態を制御するのか、コレステロール降下薬の併用がCTX 感受性増強や耐性克服に有用かどうかはまだ明確でない。申請者らは脂質ラフト上でCYLDとEGFRが共局在していることを明らかにしている。脂質ラフトにはチューブリンが局在しており、CYLDのドメインのひとつであるCAP-Gly1はチューブリンや微小管の動態を制御していることが知られている。そこで、ラフトにおけるCYLDとEGFRやチューブリンとの相互作用やチューブリンの修飾を解析し、CYLDの発現の有無が脂質ラフト上のチューブリンの動態にどう影響しているのかを解析する必要があると考えた。野生型および各ドメインを欠損したCYLDをHNSCC細胞株に発現させた細胞株にスクロース密度勾配超遠心分離法を用いてそれぞれの細胞成分を分画した。各種解析により、脂質ラフトは細胞膜と細胞質に多量に存在していることがわかったが、CYLDやEGFRの検出には至っていない。また、申請者らは細胞株でコレステロール降下薬がCTX 耐性を克服されたという結果を得ているため、前臨床的治療研究としてCYLD 発現を抑制した HNSCC 細胞株をマウスに移植し、各種コレステロール降下薬がCTXに及ぼす効果を現在検討中である。

这项研究旨在根据肿瘤抑制基因CYLD阐明EGFR的动态调节，以发展有效的EGFR靶向治疗策略。发现抑制CYLD表达通过将EGFR限制为脂质筏，表明CTX耐药性抑制了内吞作用。此外，去除胆固醇会导致脂质筏的破坏，从而克服了由于内吞作用的恢复而克服了CTX的耐药性。因此，认为CTX和降低胆固醇的药物的组合将有助于改善治疗作用。但是，尚不清楚CYLD如何调节脂质筏中EGFR的动力学，以及降低胆固醇剂的组合是否有助于提高CTX敏感性和克服抗性。申请人表明，CYLD和EGFR在脂质筏上共定位。微管蛋白位于脂质筏中，并且已知Cap-Gly1（Cap-Gly1）是CYLD的结构域之一，可以调节微管蛋白和微管的动力学。因此，我们认为有必要分析CYLD和EGFR和微管蛋白在筏中的相互作用以及小管蛋白的修饰，以及CYLD表达的存在或不存在如何影响脂质筏上的小管蛋白的动力学。将各自的细胞成分分馏为细胞系，其中使用蔗糖密度梯度超速离心在HNSCC细胞系中表达野生型和域缺陷的CYLD。各种分析表明，脂质筏在细胞膜和细胞质中大量存在，但尚未检测到CYLD或EGFR。此外，由于申请人发现降低胆固醇的药物已经克服了细胞系中的CTX耐药性，因此他们已经移植了HNSCC细胞系，将CYLD表达抑制为临床前治疗研究，目前正在研究各种胆固醇降低药物对CTX上的影响。