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生物発光蛋白質プロープを用いた植物細胞内活性酸素シグナルの解明

使用生物发光蛋白探针阐明植物细胞中的活性氧信号

基本信息

批准号：
23870013
负责人：
古市卓也
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-08-24 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1.フォラシン導入植物の作出ヒカリカモメガイ由来の活性酸素種(ROS)応答性発光蛋白質・フォラシンを植物細胞内ROSシグナル検出用プローブとして利用可能とするため、アグロバクテリウム感染法を用いてシロイヌナズナおよびタバコ培養細胞への遺伝子導入を行った。将来的にCa^<2+>シグナルとの同時計測を目指すことから、シロイヌナズナではオワンクラゲ由来のCa^<2+>レポーター蛋白質であるエクオリンを導入済みの組換え体への追導入を行い、T1種子5-4gを得た。種子検定の結果からこのうち約650粒が形質転換体であると推測され、耐性マーカーであるBASTAを含む寒天培地上で現在、20個体程度の形質転換体について栽培を進めている。また、タバコ培養細胞ではエクオリン導入株・野生株の両方に対して同様にアグロバクテリウム感染法を用いた遺伝子導入を実施済みであり、形質転換体の選抜を行っている。2.出芽酵母発現系を用いた機能解析フォラシン導入酵母培養液に過酸化水素を投与すると、過酸化水素流入に伴った持続的発光が検出される。この酵母にシロイヌナズナの過酸化水素透過性水チャネルAtTIP1;1を発現させると、フォラシン発光が亢進された。AtTIP1;1を介した過酸化水素の取り込みは処理2分後をピークに減衰するので、AtTIP1;1は酸化ストレス条件において機能抑制される可能性が示唆された。また、点変異導入フォラシンを用いた実験の結果から発光基質であるデヒドロセレンテラジンとの結合に重要なアミノ酸について同定することが出来た。フォラシンの再構成機構が明らかになったことで、発光強度およびROS特異性に優れた発光基質の開発を行えるようになると期待される。

1. Introduction of ROS into plants and their production in vitro. Introduction of ROS into plant cells using possible infection methods. In the future, Ca^<2+>, Ca ^<3 +>, Ca^<2+>, Ca^<2+>, Ca ^<3 +>, Ca The results of seed test are about 650 seeds, which are expected to change their shape and quality, and tolerance is about 20 individuals. The method of vector introduction and selection of morphologically transformed cells was used in the study of vector infection in cultured cells. 2. Analysis of the function of budding yeast production system: introduction of peracidified water into yeast culture medium, introduction of peracidified water into yeast culture medium, and detection of light emission The yeast is produced in the presence of a peracidified water permeable membrane. AtTIP1;1. AtTIP1;1 is a medium for the selection of acidified water elements. After 2 minutes of treatment, AtTIP1;1 is a medium for functional inhibition. The result of the application of the light emitting substrate is that the light emitting substrate is not suitable for the application of the light emitting substrate, and the light emitting substrate is not suitable for the application of the light emitting substrate. The light intensity and ROS specificity of the light emitting matrix are expected to be improved.