子宮内膜癌におけるラミニン－5切断を標的にした薬剤とバイオマーカーの開発

开发针对子宫内膜癌层粘连蛋白 5 裂解的药物和生物标志物

• 批准号: 24890019
• 负责人: 山下 泰恒
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890019/
• 关键词: 癌

ラミニン-5(α3β3γ2)は、α3（190kDa）、β3（145kDa）、γ2（155kDa）鎖からなる上皮組織の主要な基底膜成分で、癌浸潤、転移に関与する。また、ラミニン-5α3鎖に存在するLG4-5領域は正常組織でなく、様々な癌組織に特異的に非常に蓄積されていることが報告されている。本年度は、II型膜貫通型セリンプロテアーゼによりラミニン-5から遊離するα3鎖LG4-5領域を検出するためLG4領域に対する特異的モノクローナル抗体の作製を行った。組み換えα3鎖LG4領域を抗原として作製されたハイブリドーマの上清を用いてラミニン-5と組み換えα3鎖LG4領域に対してELIZA、ウエスタンブロット解析法によりスクリーニングを行った。その結果、LG4-5領域を含むラミニン-5(190kDa)を特異的に認識する抗体HQ4を得ることができた。ラミニン-5α3鎖のC末端に存在する球状ドメイン(LG1-LG5)は、LG3とLG4領域の間に未知のプロテアーゼで切断されるリンカー部位を持っており、細胞外に存在するセリンプロテアーゼで切断されることが示唆されている。そこで、II型膜貫通型セリンプロテアーゼ組み換え細胞外領域を用いたラミニン-5切断実験を行い、このプロテアーゼによりラミニン-5本体からLG4-5領が遊離するかを上記で作製した抗体HQ4を用いたウエスタンブロット解析法により検討した。その結果、II型膜貫通型セリンプロテアーゼ（ヘプシン）組み換え細胞外領域によるラミニン-5切断によりLG4-5領域の遊離が顕著に増大し、それはII型膜貫通型セリンプロテアーゼ阻害剤であるKD1の添加により特異的に抑制された。この結果は、II型膜貫通型セリンプロテアーゼがラミニン-5からLG4-5領域を遊離するプロテアーゼであることを示唆した。

ラミニン-5 (α3β3γ2), α3 (190kDa), β3 (145kDa), and γ2 (155kDa) are the main basement membrane components of epithelial tissue, cancer infiltration, and migration.また、ラミニン-5α3 lockに ExistenceするLG4-5 fieldはNormal tissueでなく, the specific abnormal accumulation of cancer tissue is reported. This year's type II film penetration type セリンプロテアーゼによりラミニン-5からfree するα3 lock LG 4-5 field を検出するためLG4 field に対するspecific モノクローナルantibodies を行った. The set of みα3 lock LG4 field をantigen として production されたハイブリドーマの上清を用いてラミニン-5とgroup みChange the えα3 lock LG4 field に対してELIZA, ウエスタンブロットanalytic method によりスクリーニングを行った. As a result, the specific にする antibody HQ4 containing むララミニン-5 (190kDa) in the LG4-5 domain was obtained. The presence of the C-terminus of the ラミニン-5α3 lock is the existence of the globular ドメイン (LG1-LG5), and the LG3 and LG4 areas are unknown.ーゼで Cut off the されるリンカー site をhold っており, extracellular に presenceするセリンプロテアーゼで Cut off されることがshows instigation されている.そこで、II type membrane penetration type セリンプロテアーゼgroup みchangeえ extracellular domain Use いたラミニン-5 to cut off the い験を行い、このプロテアーゼによりラミニン-5 main body LG4-5 collar free holder recorded on the production でThe antibody HQ4 was analyzed using the いたウエスタンブロット analytical method.その result, type II membrane penetration type セリンプロテアーゼ (ヘプシン) group み change extracellular domain によるラミニン-5 cutting により LG4-5 collar The domain's free and wide range of membrane-penetrating membrane-penetrating silica membranes and KD1's added により-specific にセれた.このRESULTS, Type II membrane penetration type セリンプロテアーゼがラミニン-5からLG4-5 field is free of charge.