メチル化異常による先天奇形症候群における5－ヒドロキシメチルシトシンの役割の解明

阐明 5-羟甲基胞嘧啶在甲基化异常引起的先天性畸形综合征中的作用

• 批准号: 24890229
• 负责人: 山澤 一樹
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890229/
• 关键词: エピジェネティクス; メチル化; 先天異常; ゲノムインプリンティング

近年、ゲノムDNA中に発見された5-ヒドロキシメチルシトシン（5-hydroxymethyl C: 5hmC）は、5-メチルシトシン（5-methyl C: 5mC）の酸化産物であり、DNA脱メチル化機構の一翼を担っていることから、「第6のDNA塩基」として注目されている。しかしながら、ヒトメチル化異常疾患において、5hmCの解析は現在まで全くなされていない。メチル化異常によるヒト先天奇形症候群症例を集積し、原因となっているインプリンティング調節領域のメチル化異常において5hmCがどのように関与しているかを解明することが本研究の目的である。低メチル化または高メチル化のエピ変異に起因するゲノムインプリンティング異常関連疾患約300症例の末梢血からDNAを抽出し、5mCおよび5hmC特異的抗体を用いた免疫沈降法を行った。沈降サンプルに対し各インプリンティング調節領域 (ICR) にプライマーを設定し、定量PCRを用いてICRごとに5mCおよび5hmCのアレル別の分布を調べた。最初に免疫沈降法の条件検討を綿密に行い、5mCと5hmCの交差反応を最小限に最適化した。現在解析が進行中であるが、これまでの解析の結果、ICRにおいては5mCと5hmCは同アレルに存在することが判明した。この結果は、5hmCが脱メチル化と関連し、特に低メチル化のエピ変異において何らかの役割を果たす可能性を示唆する。別の手法（酸化バイサルファイト法）による解析の準備も同時に進めており、ゲノムインプリンティングと5mC/5hmCの挙動の関連が解明されることが今後期待される。

In recent years, に発见された5-ヒドロキシメチルシトシン（5-hydroxymethyl C: 5hmC）は, 5-メチルシトシン（5-methyl C: 5mC) acidification product, DNA dehydration mechanism, one wing of the base, "the 6th DNA base", and attention.しかしながら, ヒトメチル化 abnormal disease において, 5hmC のANALYSIS はNow まで全くなされていない. Malformation abnormality, congenital odd-shaped syndrome, examples, causes, and conditionsのメチルchemical abnormality において5hmC がどのように关 and しているかを Explain the purpose of this study することがのである. There are approximately 300 abnormally related diseases caused by low-maturity and high-maturity changes. In the case of the disease, DNA was extracted from the peripheral blood, and 5mC and 5hmC-specific antibodies were tested using an immunoprecipitation method. Sedimentation control area (ICR)にプライマーをsettingし、Quantitative PCRを UseいてICRごとに5mCおよび5hmCのアレルdifferent distributionをtuningべた. The initial conditions for the immunosedimentation method were to optimize the density and the cross-reaction of 5mC and 5hmC. Now the analysis is in progress, the results of the analysis of the これまでの analysis, the ICR においては5mCと5hmCは same as the アレルにexistence, it is clear that した.このRESULTは, 5hmCが出メチル化とassociatedし, 特にlow メチル化のエピ変different において らかのservice cut をfruit たすpossibility をshows する. Different techniques (acidified バイサルファイト method) によるanalysis のpreparationもsimultaneousにjinめており、ゲノムインプリンティングと5mC/5hmC の挙动のrelated が Explain されることがLook forward to される in the future.

项目成果

インプリンティング調節領域におけるアレル特異的な5-ヒドロキシメチルシトシンの分布の解明

阐明印记调控区等位基因特异性 5-羟甲基胞嘧啶分布

• 发表时间: 2012
• 作者: Mayumi Ishida;Hiroaki Toyama;Satoshi Kawada;Hideki Onishi;八木拓也,小堺有史,伊東大介,岡田洋平,赤松和土,二瓶義廣,鍋谷彰,広瀬信義,岡野栄之,鈴木則宏;Hisayuki Hashimoto;山澤一樹
• 通讯作者: 山澤一樹