メタノール酵母細胞内動態のビジュアル化とソーティング・エンジニアリング

甲醇酵母细胞内动力学的可视化和分选工程

• 批准号: 12460149
• 负责人: 阪井 康能
• 金额: $ 8.19万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12460149/
• 关键词: メタノール資化性酵母; 細胞内輸送工学; オルガネラ; 蛋白質輸送; 異種遺伝子発現; ペルオキシソーム; 異種遺伝子発現系; Candida boidinii

1. メタノール資化性酵母におけるオルガネラ動態のビジュアル化と応用機能開発(1)代謝及び蛋白質輸送機能メタノール酵母に発達しているペルオキシソーム代謝、特に抗酸化代謝機能に関わる2つの蛋白質、カタラーゼとPmp20について、その生理生化学的機能を明らかにした。特にPmp20については、ペルオキシソームに局在するペルオキシレドキシンとして過酸化脂質を基質としたグルタチオンペルオキシダーゼであることを初めて明らかにし、カタラーゼの持つ抗酸化反応との差異を明確にした(J.Biol.Chem,276,14279)。また、これらの蛋白質のペルオキシソームへの局在化効率には差があることを示し、その差は局在化シグナルとそのレセプターとの相互作用の強さに依存していることがわかった(J.Bacteriol.,183,6372他)(2)ペルオキシソーム分解の分子機構ペルオキシソームの発達した細胞をその不要な培地に移すとペルオキシソームが選択的に分解される。この過程を2重蛍光染色法により1細胞で追跡することにより、液胞が分断化しながらペルオキシソームを包み込みこんで行くことを明らかにした。さらにその過程を支配する20以上のPAZ遺伝子を同定しペルオキシソーム分解の分子モデルを提出した(Genes Cells,7,75他)。(3)蛋白質生産系への開発と応用蛋白質やペルオキシソーム分解に関わるPEP4及びPRB1遺伝子をCandida boidiniiiからクローニングして高蛋白質生産用の宿主を創生した。さらに臨床診断酵素として有用なペルオキシソーム酵素であるD-アミノ酸オキシダーゼの高生産に成功した(Biosci, Biotechnol.Biochem.,65,627;ibid.,66 628)。平成13年度に予定されていた本研究は、申請者が基盤研究(S)を受けることになったため、辞退することになった。しかしながら、その決定通知を受け取るより以前の段階において、上記成果を論文発表するための図表作製に必要な消耗品として、本研究費の一部を充当することになった。

1. The following is true: (1) the yeast generator and the protein transport machine can activate the yeast and the special anti-acidizing machine can detect 2 protein, Pmp20, and physiology and biochemistry. In particular, the Pmp20 system is sensitive to the chemical reaction of acidified lipids. In this case, the anti-acidizing effect is clear (J.Biol.Chemie 276, 14279). There is no significant difference in the rate of chemical reaction between the two groups. There is a significant difference between the two groups (J.Bacteriol.) (2) the molecular mechanism is responsible for the decomposition of the molecular system. The molecular mechanism is designed to make sure that the cells do not need to be moved. In the process of double photoluminescence staining, the first cell was used to track the temperature difference, and the liquid cell was divided into two parts. More than 20 percent of the data in the PAZ process are determined to be the same as those in the decomposition process of the Genes Cells,7,75 molecule. (3) protein bioreactor is used in the production of protein. Protein is used to decompose PEP4 and PRB1 protein is used to decompose Candida boidiniii. High protein protein is used in high protein diet. The enzyme was cut off from the bed, the enzyme was cut off, and the enzyme was used. The enzyme, D-enzyme, acid, acid, In the 13th year of Pingcheng, it was proposed that this study and the applicant's basic study (S) would be accepted and dismissed. It is decided that the notice will be taken from the previous paragraph, the table of the previous results, the table of the necessary consumables, and the first part of this study will act as a guide.

项目成果

Horiguchi, H. et al.: "Antioxidant System within Yeast Peroxisome: Biochemical and Physiological Characterization of CbPmp20 in the Methylotrophic Yeast Candida boidinii"Journal of Biological Chemistry. 276・17. 14279-14288 (2001)

Horiguchi, H. 等人：“酵母过氧化物酶体中的抗氧化系统：甲基营养酵母 Candida boidinii 中 CbPmp20 的生化和生理特性”《生物化学杂志》276・17（2001 年）。

Komeda, T. et al.: "Construction of Protease-deficient Candida boidinii Strains Useful for Recombinant Protein Production: Cloning and Disruption of Proteinase Agene (PEP4) and Proteinase B gene (PRB1)"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 66・3. 628

Komeda, T. 等人：“可用于重组蛋白生产的蛋白酶缺陷型博伊丁念珠菌菌株的构建：蛋白酶 A 基因 (PEP4) 和蛋白酶 B 基因 (PRB1) 的克隆和破坏”生物科学、生物技术和生物化学 66・3。 628

Mukaiyama, H. et al.: "Paz2 and 13 oher PAZ gene products regulate vacuolar engulfment of peroxisomes during micropexophagy"Genes to Cells. 7・1. 75-90 (2002)

Mukaiyama, H. 等人：“Paz2 和其他 13 个 PAZ 基因产物调节微噬菌体吞噬过程中的液泡吞没”Genes to Cells 7·1 (2002)。

阪井康能: "異種タンパク質生産のための"細胞内輸送工学""生物工学会誌. 78(9). 397-401 (2000)

Yasunori Sakai：“异源蛋白质生产的细胞内运输工程”日本生物工程学会杂志78（9）397-401（2000）。

Horiguchi, H. et al.: "Peroxisomal Catalase in the Methylotrophic Yeast Candida boidinii: Transport Efficiency and Metabolic Significance"Journal of Bacteriology. 183・21. 6372-6383 (2001)

Horiguchi, H. 等人：“甲基营养酵母假丝酵母中的过氧化氢酶：运输效率和代谢意义”细菌学杂志 183・21（2001）。