酵母ペルオキシソームのマトリクス酵素及び膜タンパクの遺伝子発現調節

酵母过氧化物酶体基质酶和膜蛋白基因表达的调控

• 批准号: 07760084
• 负责人: 阪井 康能
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760084/
• 关键词: fomate dehydrogenase; dihydroxyacetone synthase; peroxisome membrane protein; peroxisome

C. boidiniiにおいて転写レベルでの遺伝子発現を追跡するために、レポーター遺伝子をプロモーター領域の下流に連結したプラスミドを持った形質転換体を作成し、誘導・非誘導などの条件でレポーター遺伝子の酵素活性を測定を行うことにより、簡便にプロモーター活性を追跡する方法を開発した。今回、Saccharomyces cerevisiae PHO5遺伝子をいくつかのペルオキシソームマトリクス酵素及び膜タンパク遺伝子のプロモーター領域に連結した結果、それらの遺伝子発現調節を、簡便にしかもコロニー上で評価できるようになった。C. boidiniiをグルコース培地からメタノール培地へ移すと顕著なペルオキシソームの形成が認められ、マトリクス及び膜タンパクが、順序正しくペルオキシソームへ合成されていることを、ノーザン解析、ウエスタン解析、レポーター遺伝子による発現の追跡を行うことにより明らかした。その結果、これらの調節が、遺伝子発現のレベル、すなわちプロモーターのレベルで行われていることがわかり、遺伝子発現調節機構の存在が示唆された。これまでに本申請者は、C. boidiniiを用いた効率的な異種遺伝子発現系をアルコールオキシダーゼ(AOD1)プロモーターを用いて開発している。同様に、菌体内で大量に発現しているジヒドロキシアセトンシンターゼ(DHAS)、また細胞質酵素であるギ酸デヒドロゲナーゼ(FDH1)について、酵素活性、ノーザン解析、ウエスタン解析、レポーターシステムを用いることにより、これらのプロモタ-活性と発現調節について検討を加えた。その結果、特にFDH1プロモーターは、AOD1プロモーターに比較しても強力が活性を持っており、発現調節についてもAOD1プロモーターとは異なった調節機構を持っていることが明らかになった。

C. Boidinii provides a simple method for tracing the enzyme activity of a protein in the presence of a protein. This time, the results of the link between the field of Saccharomyces cerevisiae PHO5 gene and the field of the enzyme and the protein of the gene are revealed in the simple and easy regulation of gene expression. C. Boidinii is a group of people who are interested in studying and studying the history of the world. As a result, the regulation of the gene, the occurrence of the gene regulation mechanism, the occurrence of the gene, the occurrence of the gene. The applicant, C. Boidinii is used in the development of heterogeneous gene expression systems. In the same way, a large number of enzymes are found in the bacteria, such as DHAS, FDH1, enzyme activity, enzyme analysis, enzyme analysis, protein expression, protein expression and protein expression. As a result, FDH1 is very active, AOD1 is very active, and AOD1 is very active.

项目成果

Yasuyoshi SAKAI et al.: "Isolation and characterization of mutants of the methylotrophic yeast, Candida boidinii S2 that are impaired in growth on peroxisome-inducing carbon sources" Bioscience, Bitechnology, and Biochemistry. 59. 869-875 (1995)

Yasuyoshi SAKAI 等人：“甲基营养酵母突变体的分离和表征，博伊丁假丝酵母 S2 在过氧化物酶体诱导碳源上生长受损”生物科学、生物技术和生物化学。

Hideshi YANASE et al.: "Enzymatic preparation of [1,3-^<13>C]dihydroxyacetone phosphate from[^<13>C]methanol and hydroxypyruvate using the methanol-assimilating system of methylotrophic yeasts" Applied Microbiology and Biotechnology. 43. 228-234 (1995)

Hideshi YANASE等人：“使用甲基营养酵母的甲醇同化系统从[^ 13 C]甲醇和羟基丙酮酸酶法制备[1，3-^ 13 C]二羟基丙酮磷酸盐”应用微生物学和生物技术。

Fumihiko SATO et al.: "Synthesis and secretion of tobacco neutral PR-5 protein by transgenic tobacco and yeast" Biochemical and Biophysical Research Communications. 211. 909-913 (1995)

Fumihiko SATO 等人：“转基因烟草和酵母合成和分泌烟草中性 PR-5 蛋白”生物化学和生物物理研究通讯。

Yasuyoshi SAKAI et al.: "The Candida boidinii peroxisomal rembrane protein Pmp30 has a role in peroxisomal proliferation and is functionally homologous to Pmp27 from Saccharomyces cerevisiae" Journal of Bacteriology. 177. 6773-6781 (1995)

Yasuyoshi SAKAI 等人：“博伊丁念珠菌过氧化物酶体膜蛋白 Pmp30 在过氧化物酶体增殖中发挥作用，并且在功能上与来自酿酒酵母的 Pmp27 同源”《细菌学杂志》。