メタノール酵母分子育種株によるバイオコンバージョン

利用甲醇酵母分子育种菌株进行生物转化

• 批准号: 06760084
• 负责人: 阪井 康能
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760084/
• 关键词: バイオコンバージョン; 異種遺伝子発現; メタノール資化性酵母; Candida boidinii; adenylate kinase; ATP

本研究では、安価なメタノールの存在により強く誘導される新規な真核生物の異種遺伝子発現系として、本申請者によって開発されたメタノール資化性酵母Candida boidinii発現系を用いたバイオコンバージョンシステムについての基礎研究を行った。まず、C.boidinii AOD1 5'-隣接断片をS.cerevisiae ADK1構造遺伝子の上流に連結しC.boidinii染色体内へ導入して、アデニル酸キナーゼの大量発現を試みた。すると菌体内蛋白質の28%にも及ぶアデニル酸キナーゼがC.boidinii内で大量発現された。また染色体挿入型あるいは自律複製型など様々な種類の形質転換体を作成しその発現制御について検討した結果、先にクローンされたC.boidinii AOD1遺伝子の5'-隣接領域にはAOD1遺伝子の発現制御を司るのに必要十分なcis-配列が存在していることも明らかとなった。さらに、得られたC.boidinii形質転換株の菌体反応を用いてアデノシンを基質としたATP生産を、形質転換株を用いて行い野生株と比較した。野生株ではアデニル酸キナーゼによるAMPからADPへの変換反応が律速となっていたが、形質転換株では、本酵素活性が5000倍から10000倍に増強されているために、培養液当たりのATP生産活性は23倍に増強した。このような形質転換株を用いてpH制御下で基質を添加しながら反応させることにより、45hの反応で230mM(117g/1)のATPを反応液中に蓄積することができた。これらの事実は、単にATPを生産するための手段ではなく、本異種遺伝子発現系が、例えば、高価なATPを添加することなく、他のATP要求性バイオコンバージョン反応に利用できる可能性を示したものである。

In this study, there are several important information systems in eukaryotes in this study. In this study, the applicant is responsible for the establishment of a new eukaryote system. In this study, the authors of this study are responsible for the establishment of a new eukaryote system. This applicant is responsible for the establishment of a comprehensive system of information-based yeast (Candida boidinii). The C.boidinii AOD1 5 fragments are connected to the S.cerevisiae ADK1 to make the upstream link. The C.boidinii chromosomes are loaded, and a large number of data are detected. The amount of protein in the bacteria was 28% and there was a large amount of acid in the C.boidinii. In the case of chromosomal replication, it is necessary to make a real-time analysis of the results of the system, first of all, we need to make sure that it is necessary to configure the system of the field AOD1 system. It is very important that the cis- configuration exists in the system. The bacteria of C. boidinii strain were isolated from C. boidinii, and the bacteria were isolated from wild plants. The bacteria were isolated from ATP and the wild strains were used to compare them. The wild strain was infected with AMP and ADP. The activity of this enzyme was 5000-fold, 10000-fold, 23-fold and 23-fold. Use the pH system to add the antivirus, the 230mM (117g/1) and the ATP in the solution for 45h. In this case, you can use the ATP to make sure that you have a problem, and that you can use the possibility to show that you have a problem. In this case, you can use the possibility to show that you have a problem. You can use the possibility to show that you have a problem. You can use the possibility to show that you have a problem. You can use it to show that you have a problem. You can use the possibility to show that you have a problem. You can use it to show that you have a problem.

项目成果

Sakai,Y.: "Isolation and characterization of mutants of the methylotrophic yeast,Candida boidinii S2 that are impaired in growth on peroxisome-inducing carbon sources." Biosci.Biotech.Biochem.(in press). (1995)

Sakai，Y.：“甲基营养酵母博伊丁假丝酵母 S2 突变体的分离和表征，这些突变体在过氧化物酶体诱导碳源上的生长受到损害。”

Sakai,Y.: "High-level ATP production by a genetically-engineered Candida yeast." Bio/Technology. 12. 291-293 (1994)

Sakai,Y.：“基因工程念珠菌酵母产生高水平 ATP。”

阪井康能: "メチロトロフ酵母Candida boidiniiを用いた異種遺伝子発現とバイオコンバージョンのための新しいシステム 酵母研究のフロントライン 生命科学・医学・産業へのインパクト" 酵母細胞研究会・瑞穂印刷産業, 200 (1994)

Yasuyoshi Sakai：“使用甲基营养酵母 Candida boidinii 进行异源基因表达和生物转化的新系统。酵母研究的前沿。对生命科学、医学和工业的影响。酵母细胞研究组/瑞穗印刷工业，200（1994 年） ) )

Tani,Y.: "Improvement of ATP production with cells of a methylotrophic yeast,Candida boidinii,by genetic engineering." Proc.Jpn.Acad.70(B). 53-57 (1994)

Tani,Y.：“通过基因工程提高甲基营养酵母博伊丁假丝酵母细胞的 ATP 产量。”

Sakai,Y.: "Expression of Saccharomyces adenylate kinase gene in Candida boidinii under the regulation of its alcohol oxidase promoter." Appl.Microbiol.Biotechnol.(in press). (1995)

Sakai，Y.：“博伊丁假丝酵母中酵母菌腺苷酸激酶基因在其醇氧化酶启动子的调节下的表达。”