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細胞質甲状腺ホルモン結合蛋白の甲状腺ホルモンによる生体調節機能における役割の解析

细胞质甲状腺激素结合蛋白在甲状腺激素生物调节功能中的作用分析

基本信息

批准号：
15590971
负责人：
橋爪潔志
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1、野生型、甲状腺ホルモン核受容体のノックアウトマウスをそれぞれ、寒冷暴露後、NADPH依存性甲状腺ホルモン結合活性、CTBP、spot14,malic enzymeのmRNAを測定、CTBPの蛋白発現量をウエスタンブロティングで評価した。寒冷暴露は、湿度45%±5%、温度5C±2Cにコントロールされるチェンバーを用い、0週、1週、3週、5週後の体重、体温を測定後、断頭し、採血、組織を氷上で、採取、細胞質、RNA測定用検体とした。2、野生型、甲状腺ホルモン核受容体のノックアウトマウスをそれぞれ、室温(20C)、とケージの下にヒートパッドをいれることにより、32C±2Cにした条件で、8時間後のマウスから、NADPH依存性甲状腺ホルモン結合活性、CTBP、spot14,malic enzymeのmRNAを測定、CTBPの蛋白発現量を評価した。3、寒冷暴露、熱暴露の前後とそれぞれのストレスを解除した時の蛋白の発現プロファイリングを比較するため、脳、心臓を摘出し、液体窒素で凍結し、氷上で、細胞質を分離し、2次元電気泳動で、展開した。各種ストレスで計時的に変化する蛋白のスポットを検出し、その同定を行っている。4、CTBP異常症の症例が報告されたため、その点突然変異を含んだcDNAを報告論文の共著者の宇佐美真一先生から供与を受け、NADPH依存性甲状腺ホルモン結合活性を評価した。論文投稿準備中である。

1. Wild type, thyroid hormone receptor nuclear receptor, thyroid hormone receptor, after cold exposure, NADPH-dependent thyroid hormone binding activity, CTBP, spot14, malic Enzyme's mRNA measurement, CTBP's protein detection and measurement. Cold exposure, humidity 45% ± 5%, temperature 5C ± 2C, 0 week, 1 week, 3 After 5 weeks, body weight and body temperature were measured, decapitation was performed, blood was collected, tissue was placed on ice, and cytoplasm and RNA were measured using a body tester. 2. Wild type, thyroid hormone receptor receptor thyroid glandれ, room temperature (20C), とケージの下にヒートパッドをいれることにより, 32C±2C にしたcondition で, 8 hours later のマウスから, NADPH-dependent thyroid ホルモン binding activity, CTBP, spot14, malic Enzyme was used to measure mRNA, and CTBP was used to evaluate the protein content. 3. Comparison between cold exposure and heat exposure before and afterるため, コ, heart を extraction し, liquid sterilization で freezing し, ice で, cytoplasm を separation し, 2-dimensional electrophoresis で, expansion し. Various ストレスで timing に変化するproteinのスポットを検出し, その同定を行っている. 4. Reports on cases of CTBP abnormality and sudden changes in CTBP including cDNA are reported together. The author, Mr. Shinichi Usami, commented on NADPH-dependent thyroid and NADPH-dependent thyroid binding activity. The paper is being prepared for submission.