リコンビナントVII型コラーゲン大量暴露が皮膚細胞増殖および腫瘍形成に与える影響

高剂量暴露于重组 VII 型胶原蛋白对皮肤细胞增殖和肿瘤形成的影响

• 批准号: 15591165
• 负责人: 松村 和子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15591165/
• 关键词: VII型コラーゲン; 培養表皮角化細胞; リコンビナント蛋白

生理的曝露量を大幅に超えたVII型コラーゲン大量曝露を行うため,大量にリコンビナントVII型コラーゲンを作成した。pDON-A1 vectorにVII型コラーゲン遺伝子COL7A1cDNA全長を導入したコンストラクトを一般的に使用されるヒト有棘細胞由来のHaCaT細胞に導入すると,少量の系では,リコンビナントVII型コラーゲンが得られるが,徐々にVII型コラーゲン産生能が低下するため,大量の系には適さないことを新たに見いだした。この結果を受けて,同様のコンストラクトをヒト胎児腎臓由来293細胞に導入し,大量培養行った。その結果この系は,培養上清1リットルに付,10μgのリコンビナントVII型コラーゲンを得られることが判明した。得られたリコンビナントVII型コラーゲンを抗ヒトVII型コラーゲン抗体LH7.2を結合させたアフィニティークロマトグラフィーにて精製したところ,リコンビナントVII型コラーゲンを精製することが出来た。精製状況は,SDS-PAGEのCoomassie染色とウエスタンブロットで290kDに1本のバンドが得られることで確認した。この精製VII型コラーゲンを培養細胞に添加して,増殖状態を観察した。VII型コラーゲンを添加したHaCaT細胞,正常ヒト培養表皮角化細胞のいずれにおいても96穴プレートに10μlの添加では,差は見られなかった。100μlの添加でも無制限な細胞増殖がおこるわけではなく,むしろ僅かながらではあるが,細胞増殖の抑制を示唆した。この実験結果から,リコンビナントVII型コラーゲンの大量曝露が抑制のかからない自立性の細胞増殖や腫瘍形成と直接結びつく結果は得られなかった。この結果は,INTERNATIONAL INVESTIGATIVE DERMATOLOGY 2003にて報告した。

The physiological exposure is greatly increased. pDON-A1 vector type VII cDNA vector COL 7A1 cDNA full-length was introduced into HaCaT cells derived from HaCaT cells in general use, and a small number of lines were introduced into HaCaT cells derived from HaCaT cells in general use. The results were similar to those obtained by introducing fetal kidney into 293 cells and culturing them in large quantities. The results were as follows: culture supernatant 1:10: The result is that the type VII antibody LH7.2 is combined with the type VII antibody LH7.2. The refining status was confirmed by the Coomassie staining of SDS-PAGE and the fact that 1 copy of the 290kD bottle was obtained. The growth status of cultured cells was observed after addition of purified type VII cells. HaCaT cells were cultured in normal culture medium with 10μl addition of type VII keratinocytes. The addition of 100μl does not limit cell proliferation. The results of this study are as follows: Type VII C-rays are exposed to a large amount of light and inhibit the growth of cells and the formation of tumors. The result is International Investigative Dermatology 2003.

项目成果

Sawamura D, et al.: "Identification of COL7A1 alternative splicing inserting 9 amino acid residues into the fibronectin type III linker domain."J Invest Dermatol. 120・6. 942-948 (2003)

Sawamura D 等人：“将 9 个氨基酸残基插入纤连蛋白 III 型接头结构域的 COL7A1 选择性剪接的鉴定”J Invest Dermatol 120·6 (2003)。

Sato-Matsumura KC, et al.: "A novel insertion mutation in COL7A1 identified in Hallopeau-Siemens recessive dystrophic epidermolysis bullosa."Acta Dermato-Venereol. 83・2. 137-138 (2003)

Sato-Matsumura KC 等人：“Hallopeau-Siemens 隐性营养不良性大疱性表皮松解症中发现的 COL7A1 新型插入突变。”Acta Dermato-Venereol 83·2 (2003)。

Tomita Y, et al.: "The simultaneous occurrence of three independent squamous cell carcinomas in a recessive dystrophic epidermolysis bullosa patient."Acta Dermato-Venereol. 83・3. 225-226 (2003)

Tomita Y 等人：“隐性营养不良性大疱性表皮松解症患者同时发生三种独立的鳞状细胞癌”。Acta Dermato-Venereol 83·3 (2003)。