細胞外基質による血管前駆細胞の分化誘導-血管内膜増殖阻害の試み-

细胞外基质诱导血管祖细胞分化 - 抑制血管内膜增殖的尝试 -

• 批准号: 15591344
• 负责人: 村上 充
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15591344/
• 关键词: extracellular matrix; endothelium; progenitor cell; matrix metalloproteinase; cllagen; laminin

1)血中血管前駆細胞の分離・培養 ヒト静脈血より血管前駆細胞を培養する方法を確立した。静脈血より単球をHistropaque-1077で分離後、growth factorを添加したEGM-2 mediumにてfibronectin-coated dishで培養。7日目に細胞をトリプシン処理しDiI acLDL、UEA-1での染色、VEGFR2、CD31、CD34にてフローサイトメトリー(FCM)を行った。ほとんどの細胞でDiI acLDL、UEA-1がdual positiveであり、またFCMでVEGFR2、CD31の発現増強がみられた。以上より、末梢血中の単球が血管内皮前駆細胞(endothelial progenitor cell ; EPC)へ分化誘導されていることが確認できた。2)血管内皮前駆細胞の細胞外基質への接着の検討 上記のように分化誘導した7日目の血管内皮前駆細胞を用いて、様々な細胞外マトリックスに対する接着について検討した。ラミニン1、ラミニン8、ラミニン10、I型コラーゲン、IV型コラーゲンを96-wellにコートして、1時間のadhesion assayを行った。結果、ラミニン10に対しての接着が最もよく、ついでラミニン8>ラミニン1>IV型コラーゲン>I型コラーゲンの順であった。3)血管内皮前駆細胞のマトリックスメタロプロテアーゼ分泌能の検討 様々な細胞外マトリックスの上で、EPCのマトリックスメタロプロテアーゼ-2(MMP-2)分泌能に違いがあるかについて検討した。ラミニン1、ラミニン8、ラミニン10、I型コラーゲン、IV型コラーゲンを96-wellにコートして7日目のEPCを再プレート。FBS(-)のmediumにて48時間培養後、medium中のMMP-2濃度をELISAで測定した。EPCはMMP-2をすべての細胞外マトリックス上で分泌しており、特にラミニン8、I型コラーゲンで多くのMMP-2分泌が認められた。

1)The method of isolation and culture of vascular progenitor cells from venous blood was established. Venous blood spheres were isolated from Histropaque-1077, and growth factors were added to EGM-2 medium in a fibrinectin-coated dish. 7. The cell cycle was treated with DiacLDL, UEA-1, VEGFR-2, CD31, CD34 and FCM. DiacLDL, UEA-1 and VEGFR2, CD31 are dual positive, FCM and VEGFR2, CD31 are enhanced. The differentiation of endothelial progenitor cells (EPC) in peripheral blood was confirmed. 2)The study of extracellular matrix differentiation of vascular endothelial progenitor cells was carried out on the 7th day. The 96-well adhesion assay is performed at 1 hour. Results: 10 ° C, 10 ° C, 10 ° C, 10 °3)Study on Secretory Energy of Vascular Endothelial Anterior Cells, EPC and MMP-2 Level 1, Level 8, Level 10, Level I, Level IV, Level 96-well, Level 7 EPC FBS(-) was incubated in medium for 48 hours and MMP-2 concentration in medium was determined by ELISA. EPC MMP-2 is secreted from extracellular cells, especially from type I cells.

项目成果

Komatsubara I, Murakami T, Kusachi S, Nakamura K, Hirohata S, Hayahi J, Takemoto S, Suezawa C, Ninomiya Y, Shiratori: "Spatialily and temporally different expression of osteonectin and osteopontin in the infarct zone of experimentally induced myocardial i

Komatsubara I、Murakami T、Kusachi S、Nakamura K、Hirohata S、Hayahi J、Takemoto S、Suezawa C、Ninomiya Y、Shiratori：“实验诱导的心肌梗塞区中骨连蛋白和骨桥蛋白的空间和时间差异表达

Mashima K, Nakatsu T, Murakami T, Kusachi S, Tominaga Y, Yamane S, Uesugi T, Mayumi E, Mitsuda Y, Tsuji T.: "Exponential-exponential cosine fitting of blood pressure decay induced by a long-acting calcium blocker, amlodipine. using home blood pressure mea

Mashima K、Nakatsu T、Murakami T、Kusachi S、Tominaga Y、Yamane S、Uesugi T、Mayumi E、Mitsuda Y、Tsuji T.：“长效钙阻滞剂引起的血压衰减的指数-指数余弦拟合，