一細胞シークエンスを用いたB細胞レパトア解析によるアレルゲン特異性決定機構の解明

使用单细胞测序通过 B 细胞库分析阐明过敏原特异性确定机制

• 批准号: 22H02284
• 负责人: 好田 正
• 金额: $ 10.9万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02284/
• 关键词: アレルギー; アレルゲン特異性; B細胞; 遺伝; B細胞レパトア

本研究では、アレルギー患者におけるアレルゲン特異性の決定機構を解明することを目的として、遺伝的背景の関与をB細胞のレパトアに着目して解析している。昨年度はまず始めに、B細胞レパトアの解析に必要な一細胞RNAシークエンスの技術を確立し、3系統のマウスを用いて抗原未感作なIgM陽性B細胞のレパトアを解析した。その結果、IgM陽性未感作B細胞の重鎖レパトアは系統ごとに大きく異なっていた。この結果は、B細胞レセプターの遺伝子の再構成はランダムに起こるとされてきた従来の定説とは異なる画期的な発見である。また、解析した3系統のうちC57BL/6は多様性に富むレパトアを有していたのに対し、BALB/cとNC/Ngaは特定のVセグメントを使用したB細胞の割合が高く、そのVセグメントは両系統で共通していた。このような生まれながらにして持っているB細胞レパトアの違いがアレルゲン特異性の個人差に関与している可能性が考えられる。次に、BALB/cとNC/Ngaに卵白アルブミン（OVA）を免疫し、OVA特異的なIgG1およびIgE陽性B細胞を分取して一細胞シークエンスに供したが、IgE陽性B細胞として分取した画分に実際にはIgE陽性B細胞が含まれていなかった。一方で、IgG1陽性B細胞のレパトアは上述のIgM陽性未感作B細胞のレパトアとは大きく異なっており、生来的に存在するB細胞レパトアのうち、特定のB細胞がOVA特異的IgG1陽性細胞へ分化しやすいことが明らかとなった。この際、OVA特異的IgG1陽性B細胞のレパトアは系統により異なっていた。今後はIgE陽性B細胞の分取技術を確立して、IgG1陽性B細胞のレパトアとの差異を確認するとともに、IgM陽性未感作B細胞のレパトアにおける各レパトアの存在比を解析する。

The purpose of this study is to elucidate the mechanisms that determine the specificity of B cells in patients, and to analyze the background and relationship between B cells and B cells In the past year, it was necessary to establish a technique for the analysis of B cell apoptosis, and to analyze the apoptosis of IgM positive B cells. The results showed that IgM positive cells were not sensitive to B cell re-lock. The result is that B cells reconstitute their genes and reconstitute them. C57BL/6 is a multi-faceted, multi-faceted, multi-faceted. It is possible that the disappearance of B cell cells due to this phenomenon may be related to individual differences in cell specificity. In addition, BALB/C, NC/NGA, OVA, IgG1 and IgE-positive B cells were isolated from BALB/C, NC/NGA, and IgE-positive B cells were isolated from BALB/C and NC/NGA. In one case, IgG1-positive B cells are not sensitive to IgM as described above. In other cases, B cells are not sensitive to IgM as described above. Specific B cells are differentiated from IgG1-positive cells. In this case, OVA specific IgG1 positive B cells were isolated from the system. In the future, the isolation technique of IgE positive B cells will be established, and the differences between IgG1 positive B cells and IgM positive B cells will be confirmed.

项目成果

2系統のマウスにおける抗原特異的IgMおよびIgG1発現B細胞の受容体(BCR)レパトア解析

两种小鼠品系中表达抗原特异性 IgM 和 IgG1 的 B 细胞的谱分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 西原千晶;築地信;服部誠;好田正
• 通讯作者: 好田正