Regulatory mechanism of plasma amino acid-Amadori product concentrations of hyperglycemic chickens

令和4年度では、第一に「課題②：フルクトサミン-3-キナーゼ（FN3K）によるアミノ酸アマドリ化合物（AA-AP）の分解速度」について研究を進めた。FN3KによるAA-APの分解速度測定において、AA-APから生成される3-デオキシグルコソン（3DG）を測定する必要がある。そこで、高速液体クロマトグラフィー質量分析計（LCMS）を用いて3DGが検出可能か否かを検討したところ、3DG単分子由来の陽イオンは検出できなかった。しかし、m/z 407(+)、425(+)、443(+)のピークが検出され、これらのピークを利用することによりLCMSを用いて3DGを定量可能であることが示された。また、3DGが他の有機化合物と結合することを阻害するためにアミノグアニジンをサンプルに添加し、m/z 219(+)のピークを検出するにより3DGを定量可能であることが示された。LCMSを用いた3DGの定量に用いる内部標準としての13C標識3DGを自ら有機合成できるか否かを検討した。その結果、13C標識グルコースとベンゾイルヒドラジンから13C標識3DG-ヒドラジンを合成し、13C標識3DG-ヒドラジンから13C標識3DGを生成可能であることが示された。AA-APが腎臓ホモジナイズ中のFN3Kによって分解されるか否かを調査したところ、m/z 219(+)のピークが検出され、AA-APがFN3Kによって分解されることが示された。第二に、「課題③：血漿中AA-APの半減期と排泄速度」についても研究を進めた。今までに、バリンAP及びグリシンAPの血中半減期はそれぞれ39分及び37分であることを示した。今年度は、イソロイシンAP、ロイシンAP、フェニル-アラニンAP、トリプトファンAP及びチロシンAPの半減期を測定し、それぞれ58分、41分、24分、54分及び35分であることが示された。

令和4年度では、第一に「課題②：フルクトサミン-3-キナーゼ（FN3K）によるアミノ酸アマドリ化合物（AA-AP）の分解速度」について研究を進めた。FN3KによるAA-APの分解速度測定において、AA-APから生成される3-デオキシグルコソン（3DG）を測定する必要がある。そこで、高速液体クロマトグラフィー質量分析計（LCMS）を用いて3DGが検出可能か否かを検討したところ、3DG単分子由来の陽イオンは検出できなかった。しかし、m/z 407(+)、425(+)、443(+)のピークが検出され、これらのピークを利用することによりLCMSを用いて3DGを定量可能であることが示された。また、3DGが他の有機化合物と結合することを阻害するためにアミノグアニジンをサンプルに添加し、m/z 219(+)のピークを検出するにより3DGを定量可能であることが示された。LCMSを用いた3DGの定量に用いる内部標準としての13C標識3DGを自ら有機合成できるか否かを検討した。その結果、13C標識グルコースとベンゾイルヒドラジンから13C標識3DG-ヒドラジンを合成し、13C標識3DG-ヒドラジンから13C標識3DGを生成可能であることが示された。AA-APが腎臓ホモジナイズ中のFN3Kによって分解されるか否かを調査したところ、m/z 219(+)のピークが検出され、AA-APがFN3Kによって分解されることが示された。第二に、「課題③：血漿中AA-APの半減期と排泄速度」についても研究を進めた。今までに、バリンAP及びグリシンAPの血中半減期はそれぞれ39分及び37分であることを示した。今年度は、イソロイシンAP、ロイシンAP、フェニル-アラニンAP、トリプトファンAP及びチロシンAPの半減期を測定し、それぞれ58分、41分、24分、54分及び35分であることが示された。