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幹細胞を用いた羊膜前駆細胞の発生機序と細胞特性解析

利用干细胞研究羊膜祖细胞的发育机制和细胞特征

基本信息

批准号：
22H02530
负责人：
大串雅俊
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02530/
关键词：
ヒトES細胞胚体外組織羊膜外胚葉栄養外胚葉

项目摘要

本研究では、ES細胞分化系を切り口に、霊長類特異的な羊膜外胚葉の発生機序とその細胞特性への理解を深めることを目的として行うものである。本年度は、経時的シングルセルRNAシークエンス結果に基づく遺伝子ネットワーク解析により、羊膜前駆体にて活性が情報する特徴的な転写因子をの候補をリスト化した。それらの転写因子の遺伝子をレンチウイルスベクターにサブクローニング、ヒトES細胞に導入する発現スクリーニングを行なったところ、単独発現によりES細胞を羊膜前駆組織へと分化誘導できる転写因子を複数同定することができた。その中の一つ、ELF3転写因子についてtet-onシステムによる発現誘導株を作製して、ELF3発現による細胞分化の詳細を詳しく調べるとともに、RNAシークエンス及びChIPシークエンスを実施して解析を進めている。また、ELF3を含むいくつかの転写因子について遺伝子破壊ES細胞株を作製し、タンパクレベルでノックアウトできていることを確認した。今後はこれらのノックアウト株に加え、複数因子を同時に欠損する細胞株の調整を進める。また、サルES細胞を用いた分化系の立ち上げをおこなった。ヒトES細胞で実施している分化培養法から若干の調整が必要だったものの、概ねヒトで見られた羊膜外胚葉分化を再現することに成功している。また、プレリミナリーな結果ではあるものの、ヒトES細胞の場合とは異なる表現型も認められている。サルでも使用可能な抗体などの実験材料の整備を概ね終えることができた。引き続き、ヒトとサルとで何が同じで何が違うのかを抑えながら、より詳細な性状解析を進める。

In this study, the cell differentiation lines of ES and amniotic ectoplasms, including amniotic ectoderm, ectoderm, ectoderm, The results of this year's and this year's RNA election results have been analyzed in terms of gene analysis and amniotic precursors activity analysis. In this study, we need to know that there is a significant difference in the number of preamniotic tissue differentiation factors in the pre-amniotic tissue. In this study, we need to know that there is a significant difference in the number of preamniotic tissue differentiation factors in the same number as that in the ES cells. In the middle of the experiment, the ELF3 writing factors, such as the leading plant, the ELF3, the cell differentiation, the cell differentiation, the RNA, and the ChIP, were analyzed. The ES cell line is broken and the ES cell line is broken. The ES cell line is broken and the cell line is broken. In the future, we will check the increase of the number of plants and the number of complex factors. At the same time, we will not change the number of cells. The differentiation system was used to differentiate the cells of ES cells. The method of differentiation and culture of ES cells was used to make sure that it was necessary to improve the differentiation of amniotic ectoderm. The results show that the ES cells do not need to know if the data are correct. It is possible to use antibodies, antibodies, materials, equipment and equipment. The purpose of this paper is to introduce the analysis of the characteristics of the control and the analysis of the characters.