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哺乳類 ERAD における逆輸送機構の包括的理解

全面了解哺乳动物 ERAD 中的逆向转运机制

基本信息

批准号：
22H02576
负责人：
沖米田司
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Kwansei Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02576/
关键词：
ERAD ユビキチンリガーゼ retrotranslocation ユビキチン

项目摘要

1. ERAD および逆輸送関連分子 KO 影響解析: RNF5, RNF185, HECT-X の機能阻害は，delF508-CFTR の ERAD および retrotranslocation を阻害した．一方で，D18G-TTR, Insig-1 の ERAD には影響を与えなかったことから，RNF5, RNF185, HECT-X の基質選択性が示唆された．2. 新規 ERAD モデル基質の構築: HiBiT tag を融合した CD4-LUM*(ERAD-L), CD4-TMD*(ERAD-M)，CD4-delF-NBD1(ERAD-C) を構築した．ERAD 速度を定量したが，ERAD 促進が見られないモデルタンパク質があったため，今後，改変・最適化を行う．3. NanoBiT 法による逆輸送分子の基質結合解析: RNF185 に関して，変異体解析により delF508-CFTR との相互作用に重要な領域が判明した．今後，他の E3 や ERAD 基質においても，NanoBiT 法による解析を進める．4. RNA-Seq 解析による ERAD 関連分子の同定: RNA-Seq 解析の結果，RNF5/185 KO 時に発現誘導されるユビキチンリガーゼ (E3) を見出した．本 E3 分子を KD すると，delF508-CFTR ERAD および retrotranslocation が劇的に阻害された．従って，本 E3 は RNF5/185 が関与する ERAD 経路の機能が低下する際に，代償的に機能する ERAD 機構に関与する可能性が示唆された．

1. Analysis of the effects of ERAD and reverse transport related molecules KO: RNF5, RNF185, HECT-X functional barriers, delF508-CFTR ERAD and retrolocation barriers. A square, D18G-TTR, Insig-1 ERAD effect and RNF5, RNF185, HECT-X matrix selectivity is shown in the table. 2. New ERAD matrix construction: HiBiT tag fusion CD4-LUM*(ERAD-L), CD4-TMD*(ERAD-M), CD4-delF-NBD1 (ERAD-C) construction.ERAD velocity quantification, ERAD promotion and quality improvement. From now on, change·optimization. 3. Matrix binding analysis of reverse transport molecules by NanoBiT method: RNF185 is relevant, and important areas of interaction between delF508 and CFTR are identified. In the future, his E3 and ERAD matrix will be analyzed by NanoBiT method. RNA-Seq analysis of ERAD related molecules identified: RNA-Seq analysis results, RNF5/185 KO induced by the occurrence of a new gene (E3) was revealed. The E3 molecule delF508-CFTR ERAD and retrotranslocation are important inhibitors of KD. This E3 shows the possibility of ERAD mechanism compensation when RNF5/185 is associated with lower ERAD circuit function.