哺乳類 ERAD における逆輸送機構の包括的理解

点击翻译按钮获取中文摘要

1. ERAD および逆輸送関連分子 KO 影響解析: RNF5, RNF185, HECT-X の機能阻害は，delF508-CFTR の ERAD および retrotranslocation を阻害した．一方で，D18G-TTR, Insig-1 の ERAD には影響を与えなかったことから，RNF5, RNF185, HECT-X の基質選択性が示唆された．2. 新規 ERAD モデル基質の構築: HiBiT tag を融合した CD4-LUM*(ERAD-L), CD4-TMD*(ERAD-M)，CD4-delF-NBD1(ERAD-C) を構築した．ERAD 速度を定量したが，ERAD 促進が見られないモデルタンパク質があったため，今後，改変・最適化を行う．3. NanoBiT 法による逆輸送分子の基質結合解析: RNF185 に関して，変異体解析により delF508-CFTR との相互作用に重要な領域が判明した．今後，他の E3 や ERAD 基質においても，NanoBiT 法による解析を進める．4. RNA-Seq 解析による ERAD 関連分子の同定: RNA-Seq 解析の結果，RNF5/185 KO 時に発現誘導されるユビキチンリガーゼ (E3) を見出した．本 E3 分子を KD すると，delF508-CFTR ERAD および retrotranslocation が劇的に阻害された．従って，本 E3 は RNF5/185 が関与する ERAD 経路の機能が低下する際に，代償的に機能する ERAD 機構に関与する可能性が示唆された．