イベリアトゲイモリが示す新規の細胞周期制御機構と強力な再生能力との関係を解明する

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本研究は、自身がモデル動物として確立したイベリアトゲイモリを用いて、再生における細胞増殖が起こる機構を解明することを目指す。中でもイモリや両生類特有の細胞周期の進行機構が存在する可能性に着目して、再生時のcyclinやCDKの機能の詳細を明らかにすることを目指す。当該年度は次の２項目を実施した。（１）イモリに見られるCDK1に依存しない細胞周期の進行機構の証明に取り組み、CDK1ノックアウトイモリの個体レベルでの細胞増殖と、細胞分裂のパターンを解析した。KOイモリの結合組織細胞を培養する方法により、細胞分裂のパターンの解析を行った。また、CDK1の機能を補う因子の候補として予測されるCDK2についてもノックアウト個体を作製して、その機能を調べた。（２）イモリにおいて恒常的に発現するcyclin D遺伝子の働きについて、骨格筋の分化と成熟に焦点を当てて解析した。cyckin D1ノックアウトイモリでは、成長に遅れが見られたが、特に骨格筋形成の遅滞が顕著であった。そこで、骨格筋の元となる筋芽細胞の抗体染色を行い、野生型個体との比較を行った。さらに、cyclin D1 ノックアウトイモリの骨格筋の遺伝子発現プロファイルを明らかにするために、遺伝子発現サンプルを調整する準備を行なった。また、３種類あるcyclin D遺伝子のうち、cyclin D3とD2のノックアウトイモリ作製を進めた。これらのノックアウトイモリを用いて四肢再生実験を行い、少なくともcyclin D1は四肢再生に不要であることがわかった。