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糖転移酵素群によるNOTCHタンパク質の分泌・分解の仕分け機構の解明

阐明糖基转移酶分泌和降解 NOTCH 蛋白的分选机制

基本信息

批准号：
22H02815
负责人：
岡島徹也
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02815/
关键词：
NOTCH O-GlcNAc EOGT POFUT1 POGLUT1 コラーゲン

项目摘要

(1) 糖転移酵素群によるNOTCHタンパク質の分泌・分解の仕分け機構の解析に向けて、主要な糖転移酵素であるPOFUT1、POGLUT1、EOGTを欠損したHEK293細胞を樹立した。予想通り、この３重変異細胞では、Notch1の細胞膜への発現が消失した。一方、POFUT1、POGLUT1、もしくはEOGTを発現させることにより、Notch1の細胞膜発現が部分的に回復した。従って、３重変異細胞はO型糖鎖の分泌過程における機能を反映することが確認できた。また、３重変異細胞では、O型糖鎖を完全に欠損するのか、一部、残留するO型糖鎖が存在するのかを確かめるために、内在性Notch受容体を免疫沈降により単離し、プロテアーゼ消化産物を質量分析をするための予備実験を実施した。(2) ３重変異細胞におけるNOTCH受容体の局在の異常を明らかにするために免疫染色をしたところ、NOTCH受容体の細胞内への蓄積が観察された。こうした異常NOTCH受容体の分解機構を明らかにするために、プロテアソームやオートファジーの阻害剤を用いて解析したが、異常NOTCH受容体の発現量は、これらの阻害剤により大きな変化は認められなかった。これらの結果より、３重変異細胞におけるNOTCH受容体の分解抵抗性の分子機構を明らかにすることが重要であると考えられた。(３) O型糖鎖欠損NOTCH受容体を認識し、分泌や分解に導く分子機構を明らかにするために、相互作用因子の探索を行った。１つは、BioID法を用いて糖鎖変異型NOTCH1と相互作用する分子を網羅的に同定した。別のアプローチとして、３重変異細胞に発現する内在性NOTCHに相互作用するタンパク質を免疫沈降法により同定した。複数の分子が両グループに共通しており、共通する分子に着目して、機能解析を進めることの有効性が示唆された。

The main results are as follows: (1) Glycosyltransferase group is responsible for the secretion and decomposition of NOTCH enzymes, and the main glucose transfer enzymes, POFUT1, POGLUT1, EOGT, are isolated from HEK293 cells. There is no evidence that the membrane of the cell has disappeared. There is no evidence of disappearance of the membrane of the cell. There is no sign of disappearance of the cell membrane. One party, POFUT1, POGLUT1, Notch1, POGLUT1, and so on, can see that the membrane of the cell membrane is not present. The process of type O glucose secretion can reflect the confirmation of glucose secretion. There are three types of sugar, one type O glucose, one type of glucose, one, three, one, three, six, four, one, three, one, three, three, (2) 3-fold NOTCH receptors were detected by immunostaining and NOTCH receptors. The NOTCH capacitive body decomposition mechanism indicates that the system is used to prevent the damage. The system is used to analyze the volume of the NOTCH capacitor, and to prevent the damage. The results showed that the molecular mechanism of NOTCH receptor decomposition resistance was clear that the important factors were important. (3) the molecular mechanism of type O glucose deficiency NOTCH receptor recognition and secretion is sensitive, and the interaction factors are explored. 1. The BioID method uses the same protocol of the sugar-sensitive NOTCH1 interaction protocol molecular network. The endogenous NOTCH interactions were detected by immunoprecipitation and immunoprecipitation methods. The multiplicative data sets the common data, the common data sets the eye, and the machine can parse the data to indicate that there is a cause of abetting.

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Glycoproteomics of NOTCH1 EGF repeat fragments overexpressed with different glycosyltransferases in HEK293T cells reveals insights into O-GlcNAcylation of NOTCH1

HEK293T 细胞中用不同糖基转移酶过表达的 NOTCH1 EGF 重复片段的糖蛋白组学揭示了对 NOTCH1 O-GlcNAc 酰化的见解

DOI：
10.1093/glycob/cwac015
发表时间：
2022
期刊：
Glycobiology
影响因子：
4.3
作者：
Tsukamoto Yohei;Ogawa Mitsutaka;Yogi Kentarou;Tashima Yuko;Takeuchi Hideyuki;Okajima Tetsuya
通讯作者：
Okajima Tetsuya

O-fucoseとO-glucose修飾はDLK1の効率的な輸送に重要である

O-岩藻糖和 O-葡萄糖修饰对于 DLK1 的有效运输非常重要

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
田嶌優子;後藤和佳子;塚本庸平;小川光貴;竹内英之;岡島徹也
通讯作者：
岡島徹也

Inhibitory machinery for the functional dystroglycan glycosylation

功能性肌营养不良聚糖糖基化的抑制机制

DOI：
10.1093/jb/mvad003
发表时间：
2023
期刊：
The Journal of Biochemistry
影响因子：
0
作者：
Kondo Yuji;Okajima Tetsuya
通讯作者：
Okajima Tetsuya

細胞外O-GlcNAc転移酵素の組織発見分布解析と生体内における機能探索

细胞外O-GlcNAc转移酶的组织发现和分布分析以及体内功能探索

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
近藤裕史;岡島徹也
通讯作者：
岡島徹也

3’-Sialyllactose on Notch: Notch1 functions as a scaffold of O-linked, 3’-sialyllactosylated glycans

Notch 上的 3-唾液酸乳糖：Notch1 充当 O 连接、3-唾液酸乳糖基化聚糖的支架

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yohei Tsukamoto;Kazuhiro Aoki;Yoshiki Narimatsu;Yusuke Urata;Wataru Saiki;Michael Tiemeyer;Henrik Clausen;Tetsuya Okajima;Hideyuki Takeuchi
通讯作者：
Hideyuki Takeuchi