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Elucidating the transcriptional network for profibrotic secretome and its application for heart failure therapy

阐明促纤维化分泌蛋白组的转录网络及其在心力衰竭治疗中的应用

基本信息

批准号：
22H03071
负责人：
星野温
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03071/
关键词：
線維化セクレトームスクリーニング

项目摘要

NRF2の線維化関連遺伝子発現調節機構の解明のため、NRF2転写複合体の解析をBioID（近位依存性ビオチン標識）にて行った。BioIDはNRF2-TurboIDノックイン細胞、Smad4-TurboIDノックイン細胞をそれぞれCRISPRによるゲノム編集にて作成し生理的タンパク質発現レベルでのタンパク質複合体評価を実施した。その結果、corepressorとして知られるDDX54がNRF2の線維化関連遺伝子発現抑制に関与していることが示唆された。マウスモデルでの評価は、Keap1-floxマウスをPostn-MerCreMerマウスと掛け合わせた薬剤誘導性・線維芽細胞特異的Keaplノックアウトマウスを用いて、圧負荷心不全モデルにおいて心臓線維化の評価を行った。８週齢マウスにタモキシフェンを腹腔内投与し、９週齢で横行大動脈縮窄術を施行し１３週齢で評価を行った。Keap1ノックアウトで有意な線維化抑制を確認するとともに心肥大の抑制も確認できた。また腎臓の線維化に関しても片側尿細管結紮モデルで評価したところ、こちらも間質線維化の抑制を確認できた。中分子ペプチドに関しては10mM程度の高容量ではNRF2活性化作用が確認できたが、細胞内への移行が簡単ではなくTATペプチドを結合したり、脂質粒子での細胞内取り込みを向上を施したが低用量での活性化が難しいため低分子化合物での評価を進める方針とした。

NRF2's line-dimensional correlation is explained by the explanation of the regulatory mechanism, and the analysis of the NRF2 complex is performed by BioID (proximal dependency identification). BioIDはNRF2-TurboIDノックインcell, Smad4-TurboIDノックインcellをそれぞれCRISPR によるゲノムCompiled by にて成しphysiological タンパク性発开レベルでのタンパク性性综合综合価を実师した. The result of the corepressor is the linear dimensionality of the DDX54 NRF2, which is related to the linear dimensionality of the corepressor and the corepressor. MATCH Sexual and line-dimensional bud cell-specific Keapl ノックアウトマウスを use いて, pressure load insufficiency モデルにおいて心臓 line-dimensional の evaluation価を行った. Intraperitoneal administration of the intraperitoneal injection of a large artery was performed at 8 weeks, and transverse aortic coarctation was performed at 9 weeks. At 13 weeks, the patient was evaluated and performed. Keap1ノックアウトでIntentional linear dimension suppressionをconfirmationするとともにcardiac hypertrophyのsuppressionもconfirmationできた.またkidney line dimensionalization に关してもlateral urinary straw ligation モデルでreview価したところ、こちらもinterstitial line dimensionalization のinhibition をconfirmationできた. High-capacity NRF2 activating effect of medium molecule NRF2 activation at 10mM level, intracellular migration of simple へではなくTAT functionをCombined したり, lipid particles でのtake り込みをup をapply したが low dosage でのactivation がしいためlow molecular compounds でのvaluation価を Advance める policy とした.