SHH型髄芽腫における異常RNAプロセシングの解明

本研究課題ではRNAプロセスの異常をU1 snRNAの機能に基づき、それぞれに特化した解析を行うことで、変異により引き起こされる細胞内RNAプロセスの異常を解明し、髄芽腫の病態を明らかにすることを目的とし研究を進めている。初年度は主に試料の収集と解析手法の確立を行った。U1 snRNA変異発現細胞株を２つの既存細胞株を用いて確立した。ヒト髄芽腫検体を協力機関より収集した。臨床検体に対して、RNAシークエンスとU1 snRNA変異の評価を行った。RNAシークエンスのデータを用いてスプライシング異常解析を行うと、これまでの結果と同様に約1,000遺伝子にスプライシング異常が同定されていることが確認できた。しかし、約７割のスプライシング異常は一部の症例でしか認められないため、共通して発現量の高い異常イベントを今後探索していく。スプライシング異常のさらなる解析のため、一分子ロングリードシークエンスを用いたスプライシング異常解析を進めている。テストランとしてデータを取得しており、このデータを用いて今後解析手法を整えていく。合わせて、シークエンス精度の評価を行いサンプル調整法やシークエンス条件を調整し、今後症例数を増やしていく予定である。RNA局在異常解析のためにsubRNA-seq手法の確立を行った。シークエンスを行い良好に分画が行われていることが確認できた。解析数を増やしていくとともに解析も進めていく予定である。次年度以降、データの集積を進めていき、腫瘍の発生もしくは維持に必要な異常なイベントを探索していく。

本研究課題ではRNAプロセスの異常をU1 snRNAの機能に基づき、それぞれに特化した解析を行うことで、変異により引き起こされる細胞内RNAプロセスの異常を解明し、髄芽腫の病態を明らかにすることを目的とし研究を進めている。初年度は主に試料の収集と解析手法の確立を行った。U1 snRNA変異発現細胞株を２つの既存細胞株を用いて確立した。ヒト髄芽腫検体を協力機関より収集した。臨床検体に対して、RNAシークエンスとU1 snRNA変異の評価を行った。RNAシークエンスのデータを用いてスプライシング異常解析を行うと、これまでの結果と同様に約1,000遺伝子にスプライシング異常が同定されていることが確認できた。しかし、約７割のスプライシング異常は一部の症例でしか認められないため、共通して発現量の高い異常イベントを今後探索していく。スプライシング異常のさらなる解析のため、一分子ロングリードシークエンスを用いたスプライシング異常解析を進めている。テストランとしてデータを取得しており、このデータを用いて今後解析手法を整えていく。合わせて、シークエンス精度の評価を行いサンプル調整法やシークエンス条件を調整し、今後症例数を増やしていく予定である。RNA局在異常解析のためにsubRNA-seq手法の確立を行った。シークエンスを行い良好に分画が行われていることが確認できた。解析数を増やしていくとともに解析も進めていく予定である。次年度以降、データの集積を進めていき、腫瘍の発生もしくは維持に必要な異常なイベントを探索していく。