シトクロムP450camオペロン・リプレッサ-(CamR蛋白質)の構造と機能解析

细胞色素 P450cam 操纵子阻遏蛋白（CamR 蛋白）的结构和功能分析

• 批准号: 03259213
• 负责人: 堀内 忠郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03259213/
• 关键词: シトクロムP450camオペロン; CamR蛋白質(リプレッサ-); 多量精製; 基質との相互作用; 結晶化; プロモ-タ-

シトクロムPー450camオペロン(camDCAB)・リプレッサ-(CamR蛋白質)について,以下の研究成果を得た。1.CamR蛋白質の多量生産株を作製し,この菌から,硫安分画,DE52クロマトグラフィ-およびゲル濾過により,総蛋白量の2%の収量で純粋なCamR蛋白質を得た。2.CamR蛋白質は,サブユニットの分子量が約20,000のホモダイマ-構造を持ち,その等電点は約5.8である。CamR蛋白質のオペレ-タ-DNAへの結合の解離定数は5x10^<-8>Mで,誘導物質(カンファ-)により結合能を朱った。その際,CD差スペクトルによれば,カンファ-の結合により,CD差スペクトルによれば,カンファ-の結合により,CamR蛋白質の二次構造はαーヘリックスの含量が約10%減少し,βーシ-トも少し減少した。3.カンファ-のみならず,その代謝物産である5ーエクソーヒドロキシカンファ-,2,5ージケトーカンファンとノンカンファ-およびアダマンタンが,CamR蛋白質に結合する。4.本研究班の協力(兵庫教育大・白木原康雄博士)により,CamR蛋白質の結晶化を研究中であり,この蛋白質が結晶化されやすいとの結果が得られた。また,DNAが結合したCamR蛋白質の結晶化についても検討中である。5.CamR蛋白質のオペレ-タ-と基質の結合部位のアミノ酸配列について検討するため,変異CamR蛋白質を作製中である。6.camR遺伝子とcamDCAB遺伝子群は,お互いに逆向きで,リプレッサ-により同時に抑制されることを確認した。CamR蛋白質をコ-ドするcamR遺伝子の転写開始点を決定した。そのプロモ-タ-活性は,シトクロムPー450camオペロンのそれの約1/5である。

The following results were obtained from the study of P-450cam protein (camDCAB). 1. Production of CamR protein in large quantities from strains, bacteria, sulfur,DE52, filtration, total protein content of 2% of the total amount of pure CamR protein was obtained. 2. CamR protein has a molecular weight of about 20,000 and an isoelectric point of about 5.8. The dissociation constant of CamR protein binding is 5x10^<-8>M, and the binding energy of inducing substance is 5x10^ M In addition, the secondary structure of CamR protein decreased by about 10% in α-and β-protein content. 3. CamR protein binding: CamR protein binding. 4. In collaboration with Dr. Yasuo Shirakihara, Hyogo University of Education, the results of the study on the crystallization of CamR protein were obtained. DNA binds to CamR protein and crystallizes. 5. CamR protein binding sites and matrix acid alignment in the study, different CamR protein in the process of preparation 6. camR gene and camDCAB gene group are opposite, opposite, opposite. CamR protein expression is determined by the starting point of camR protein expression. About 1/5th of the total number of visitors to the site is due to the activity of the site.