シロイヌナズナを用いた光合成遺伝子発現に介在するシグナル伝達機構の解析

拟南芥光合基因表达介导的信号转导机制分析

• 批准号: 03262208
• 负责人: 小林 裕和
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03262208/
• 关键词: 光合成遺伝子; シグナル伝達; 突然変異体; シロイヌナズナ; Arabidopsis thaliana; rbcS; cab; PCR

突然変異体の作製・解析および変異相補という方法論は,シグナル伝達機構の解明において極めて強力な研究手段である.この種の方法論の適用が可能であるモデル植物シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)を実験に共した.<1.選抜のための遺伝子の植物体への導入>___ー光合成遺伝子としてリブロ-ス-1.5ー二リン酸カルボキシラ-ゼ/オキシゲナ-ゼ(RubisCO)のSサブユニット遺伝子(rbcS)およびクロロフィルa/b結合タンパク質遺伝子(cab)に着目した.校正活性を有するDNAポリメラ-ゼを用いたDNAポリメラ-ゼ増幅法(PCR)により,シロイヌナズナrbcSー3Bおよびcab1およびcab1のプロモ-タ-とそれらの上流を含むそれぞれ約1,500ヌクレオチドからなる領域を作製した.これらプロモ-タ-の下流にreporter遺伝子としてβーglucuronidase(GUS)あるいはchloramphenicol acetyltransferase(CAT)遺伝子を繋ぎ,シロイヌナズナ(ColumbiaおよびNorway)への導入を試みた.また,別途上記PCR法により増幅したアルコ-ル脱水素酵素遺伝子(adh)をrbcSー3Bプロモ-タ-の下流に繋ぎ,シロイヌナズナ(Bensheim,adh^-)への導入を試みた.<2.突然変異体の作製と選抜>___ー上記形質転換植物体から応られる種子を変異原ethylmethanesulfonate(EMS)により処理し,得られるM_2個体のうちホモ接合よって光合成能が低下した突然変異体を選抜する.光合成突然変異体が長波長紫外光の照射により赤色螢光を発することを確認した.また,adh遺伝子発現が低下している植物体は,allyl alcoholを植物毒性アルデヒドacroleinに変換できないためallyl alcohol耐性であった.

The production and analysis of the sudden change of the alien body is the methodology of the heterogeneous complement and the method of the sudden change of the body, and the explanation of the mechanism of the sudden change is very strong. The research method is applicable to the research method and the possibility of applying it is the plant シロイヌナズナ (Arabidopsis thaliana)を実験に公した.<1. Select the plant body and import it>__ _Photosynthetic acid カルボキシラ-ゼ/オキシゲナ-ゼ(RubisCO)のSサブユニット伝子(rbcS)およびクロロフィルa/b knot合タンパク性缝子(cab)に目した.Correction activity するDNAポリメラ-ゼを用いたDNAポリメラ-ゼamplification method (PCR)により,シロイヌナズナrbcSー3Bおよびc ab1およびcab1のプロモ-タ-とそれらの上流を contain むそれぞれabout 1,500ヌクレオチドからなる区した.これらプロモ-タ-の下にreporter伝子としてβーglucuronidase(GUS)あるいはchloramphenicol acetyltransferase (CAT) 缝子を行ぎ, シロイヌナズナ (Columbia およびNorway) への Import をtest みた. また, OTHER WAY Shangji PCR method により amplification したアルコ-ルDehydrase Enzyme 缝子(adh)をrbcSー3Bプロモ-タ-の流に式ぎ,シロイヌナズナ(Bensheim,adh^-)へのINTRODUCT みた.<2.Suddenly changing the body's productionとSelect ＊>___ーRemember the morphological change of plant body から応られるseed を変isogen ethylmethanesulfonate(EMS) and によりtreatmentし, get られるM_2 individual のうちホモjoining よって photosynthesis The energy is low, the body is suddenly changed, the body is suddenly changed, the body is suddenly changed, the photo-synthetic body is suddenly changed, the long-wavelength ultraviolet light is irradiated, and the color is red. Fluorescence を発することをconfirmation した.また,adh缝子発appears がlow しているPlant body は,allyl Alcohol アルデヒドacrolein に変change できないためallyl alcohol tolerance であった.

项目成果

A.M.Viale,H.Kobayashi,T.Akazawa,and S.Henikoff: "rbcR,a gene coding for a member of the LysR family of transcriptional requlators,is located upstream of the expressed set of ribulose 1,5ーbisphoshpate carboxylase/oxygenase genes in the photosynthetic bacte

A.M. Viale、H. Kobayashi、T. Akazawa 和 S. Henikoff：“rbcR 是转录调节因子 LysR 家族成员的编码基因，位于核酮糖 1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶表达组的上游光合细菌中的基因

H.Kobayshi,A.M.Viale,T.takabe,T.Akazawa,K.wada,K.Shinozaki,K.Kobayashi,and M.Sugiura: "Sequence and expression of genes encoding the large and small subunits of ribulose 1,5ーbisphosphate carboxylase/oxygenase from Chromatium vinosum" Gene. 97. 55-62 (1991

H. Kobayshi、A. M. Viale、T. takabe、T. Akazawa、K. wada、K. Shinozaki、K. Kobayashi 和 M. Sugiura：“编码核酮糖 1,5- 大亚基和小亚基的基因的序列和表达来自 Chromatium v​​inosum 的二磷酸羧化酶/加氧酶”Gene. 97. 55-62 (1991

H.Kobayashi: "Differentiation of amyloplasts and chromoplasts" In Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants,Vol.7B: The Photosynthetic Apparatus: Molecular Biology and Operation,edited by L.Bogorad,and I.K.Vasil,Academic Press,San Diego. 395-415 (1

H.Kobayashi：“植物细胞培养和体细胞遗传学中的淀粉体和有色体的分化”，第 7B 卷：光合装置：分子生物学和操作，由 L.Bogorad 和 I.K.Vasil 编辑，学术出版社，圣地亚哥。

T.Tsuge,and H.Hobayashi: "Molecular analysis of genes for pathogenicity of Alternaria alternata Japanese pear pathotype,a hostーspecific toxin producer" In Molecular Strategies of Pathogens and Host Plants,edited by S.S.Patil,S.Ouchi,D.Mills,and C.Mance,Sp

T. Tsuge 和 H. Hobayashi：“对宿主特异性毒素生产者 Alternaria alternata Japanese pear 致病型致病性基因的分子分析”，《病原体和宿主植物的分子策略》，由 S.S.Patil、S.Ouchi、D 编辑。米尔斯和 C.曼斯，Sp。

杉山 達夫,仲本 準,小林 裕和: "「生物化学実験法シリ-ズ」光合成酵素系の研究法: 細胞から遺伝子まで" 学会出版センタ-,

Tatsuo Sugiyama、Jun Nakamoto、Hirokazu Kobayashi：《生物化学实验方法系列》光合酶系统的研究方法：从细胞到基因，学术出版中心，